Corso di Laurea in Biotecnologie, AA 2007/2008 Programma del Corso di Biologia Molecolare per la prima prova in itinere - Struttura degli acidi nucleici Basi puriniche e pirimidiniche, nucleosidi, nucleotidi; legami fosfodierici, legami Nglicosidici, scheletro zucchero-fosfato, legami idrogeno fra basi complementari, estremità 3’ e 5’, Struttura del DNA a doppia elica. Replicazione del DNA Meccanismo generale. Frammenti di Okazaki. Inizio, allungamento, termine. Repliconi, forche e bolle replicative. Replicazione bidirezionale. Definizione di innesco o primer. Vari tipi di inneschi. Principali proteine ed enzimi della replicazione nei procarioti e negli eucarioti: struttura e funzione delle DNA polimerasi (DNA polimerasi I, III, ) funzioni associate alle DNA polimerasi (correzione delle bozze, esonucleasi 5’>3’, primasi), elicasi, primasi, proteine SSB, ligasi, topoisomerasi. Maturazione dei frammenti di Okazaki. Le origini della replicazione e la loro attivazione. Struttura e attivazione di oriC, ruolo della proteina dnaA. Origini della replicazione di lievito (ARS, ORC). Termine della replicazione del DNA. Il problema della replicazione delle estremità dei cromosomi lineari. Struttura dei telomeri (ripetizioni telomeriche, filamento 3’ protrudente, T-loop). Struttura e funzione della telomerasi. Telomerasi, senescenza cellulare e cancerogenesi. Replicazione del DNA in: adenovirus, batteriofago . - Tecniche del DNA ricombinante Modificazione e restrizione del DNA nei procarioti: ruolo biologico delle endonucleasi di restrizione. Sequenze palindromiche. Uso degli enzimi di restrizione di tipo II in labortorio. Clonazione molecolare: vettori (plasmidi, batteriofagi, cosmidi, YAC, vettori di espressione), genoteche di DNA genomico e di cDNA, metodi di screening delle genoteche. Esempi di strategie utilizzabili per la clonazione (per omolgia di sequenza, con oligonucleotidi costruiti in base alla sequenza proteica, con anticorpi). Metodi di marcatura del DNA: nick translation e random priming. Reazione a catena della DNA polimerasi (PCR): metodo e principali applicazioni. Mutagenesi sito-specifica. Sequenziamento del DNA: metodo classico della terminazione di catena, sequenziamento automatico.