SOFTWARE NLM 7794 VER 23/02/2017 DO022 Software Real Gene Versione 2.1 NUCLEAR LASER MEDICINE S.r.l. UFFICI OPERATIVI: Viale delle Industrie, 3 – 20090 SETTALA MI (Italy) Tel (+39) 02/95. 24. 51 - Fax (+39) 02/95. 24. 52. 37 SITO INTERNET: www.nlm.it – E-MAIL: [email protected] Sommario Sommario ............................................................................................................................................................... 2 1 Caratteristiche del computer.......................................................................................................................... 3 2 Installazione del programma .......................................................................................................................... 3 3 Installazione dei prerequisiti software ........................................................................................................... 3 4 Avvio del programma ..................................................................................................................................... 3 5 Esportazione dei dati da una seduta Real Time ............................................................................................. 4 6 Analisi della seduta e genotipizzazione dei campioni .................................................................................... 5 6.1 Finestra Acquisizione dati ...................................................................................................................... 5 6.2 Finestra Analisi e convalida ................................................................................................................... 7 6.2.1 Codici Melt Tm .............................................................................................................................. 7 6.2.2 Codici chimica Taqman ................................................................................................................ 10 7 Campioni analizzati con più codici nella stessa seduta ................................................................................ 11 8 Inserimento manuale dei dati del paziente e delle note .............................................................................. 12 9 Importazione della lista di lavoro ................................................................................................................. 13 10 Convalida dell’analisi e stampa del referto .............................................................................................. 14 11 Esportazione dei risultati .......................................................................................................................... 15 12 Ricerca e consultazione dei referti ........................................................................................................... 16 13 Backup di tutti i dati in archivio ................................................................................................................ 16 14 RISOLUZIONE DEI PROBLEMI .................................................................................................................... 17 2 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 1 Caratteristiche del computer Configurazione minima: processore a 32 bit o 64 bit da 1 GHz o superiore, 1 GB di RAM, 500 MB di spazio disponibile su disco rigido e scheda grafica con risoluzione 1024 x 768 o superiore. Sistema operativo: Windows XP SP3, Windows 7 (32/64 bit), Windows 8 (32/64 bit). Prerequisiti software: Microsoft .NET Framework 3.5 SP1, Microsoft Visual C++ 2010 Redistributable Package. Software applicativo di supporto: Adobe Reader 2 Installazione del programma 1. Inserire il CD 2. Eseguire il file setup, premere il tasto Avanti fino ad installazione completata 3. Successivamente premere Chiudi: l’icona del programma apparirà sul desktop. 3 Installazione dei prerequisiti software Nei sistemi operativi più recenti (Windows 7 o 8) i software richiesti per l’installazione del programma sono già presenti nel sistema, mentre potrebbero essere assenti in sistemi operativi meno aggiornati. La procedura verifica all’avvio la loro presenza e, se assenti, avvia in automatico l e rispettive installazioni. E’ possibile effettuare anche manualmente l'installazione dei software richiesti eseguendo i files contenuti all'interno delle cartelle presenti nel cd di installazione. Per installare Microsoft.NET Framework 3.5 SP1 Procedura di installazione aprire la cartella dotnet35full ed eseguire dotnetfx35.exe Microsoft Visual C++ 2010 Redistributable Package aprire la cartella vcredist_x86_2010 ed eseguire vcredist_x86.exe 4 Avvio del programma 1. Aprire il programma cliccando due volte sull'icona Real Gene 2.1. Al primo avvio il programma crea in automatico tutta la struttura delle cartelle. Il percorso principale dove verranno memorizzati tutti i dati e i documenti è il seguente: C:\Real Gene Al suo interno sono presenti le seguenti cartelle: Cartella Analisi Config Dati Esportazione Contenuto Archivio dei report generati dal software sia in formato pdf che in formato xml. Vengono archiviati sia i report dei singoli campioni che i report multipli dati di configurazione e informazioni personalizzabili da pack di utente (es: ragione sociale) Dati .sdf, il database in formato criptato e protetto da password* File .xml originati durante l’esportazione e contenenti le informazioni di refertazione Esportazione Lista di File .xml con le informazioni relative al paziente, ai codici e ai fattori di cui Lavoro è richiesta l’analisi Export CFX File .xml esportati dal software Bio-Rad CFX Manager Temp cartella temporanea *Nota: il database è in formato SQL Server Compact vers. 3.5 3 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 2. Inserire Utente e Password (di default admin per entrambi i campi) 3. Premere Conferma. Se non sono stati ancora creati nuovi utenti compare la seguente immagine: 4. Nella sezione gestione utenti premere il tasto per aggiungere i dati di un nuovo utente e spuntare le caselle relative alle funzioni abilitate desiderate 5. Premere Conferma nuovo 6. Nella sezione dati laboratorio è possibile inserire i dati relativi al laboratorio e un eventuale logo 7. Successivamente premere il tasto Chiudi per uscire dal programma 8. Accedere nuovamente al programma con le credenziali del nuovo utente creato 9. E’ possibile in qualsiasi momento modificare o eliminare le informazioni inserite accedendo come admin: utilizzare il tasto per modificare i dati di un utente già inserito e il tasto per eliminarne uno Attenzione: non è possibile eliminare utenti che abbiano confermato o validato analisi. 5 Esportazione dei dati da una seduta Real Time Per il corretto funzionamento del software Real Gene 2.1 è necessario: 1. non modificare il nome con cui di default viene salvata la seduta dal CFX (ad esempio admin_2015-03-03 12-03-34_BR101329). Le informazioni contenute nel nome sono infatti necessarie per la tracciabilità delle sedute e per l’analisi con il software Real Gene 2.1 (in quanto vengono riportate data e ora dell’analisi) 2. nominare i campioni prima di esportare la seduta (campo Sample Name); non usare caratteri speciali come l’apostrofo, l’accento o altro I campioni da analizzare devono essere denominati come UNK nel campo Sample Type. Solo per i prodotti basati sulla chimica Taqman, denominare il controllo negativo (se presente) come NTC (No Template Control) Attenzione: ciò che viene inserito nel campo Sample Name viene utilizzato dal software DO022 come codice paziente al momento della refertazione 3. prima di esportare la seduta nominare i target esattamente come riportato di seguito (rispettando anche maiuscole e minuscole): 4 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 a) prodotti basati sull’analisi della temperatura di melting (Melt Tm): FAM C677T JOE A1298C Cod. NLM FAM AA831 FII Cod. NLM AA1397/48 ROX CY5 FV Leiden e FII PAI-1 4G/5G AA832 FV Leiden AA901 C677T CY5.5 FV HR2 AA902 A1298C AA933 FV HR2 AA981 AA1034 AA1181 FV Y1702C PAI-1 4G/5G rs60 o rs17 b) prodotti basati sulla chimica Taqman: Cod. NLM FAM HEX ROX CY5 Cod. NLM FAM HEX AA1370/48 FII mut FII wt FV Leiden mut FV Leiden wt AA780 FV Leiden mut FV Leiden wt AA1371/48 C677T mut C677T wt A1298C mut A1298C wt AA781 FII mut FII wt AA1399/48 FV HR2 mut FV HR2 wt PAI-1 4G PAI-1 5G AA785 AA786 C677T mut A1298C mut C677T wt A1298C wt Una volta terminata la seduta di Real Time esportare dal CFX i dati necessari al software per effettuare l’analisi: 1. per i codici Melt Tm: selezionare la tabella riportata nella finestra Melt curve Data (la tabella si colora di azzurro) e con il tasto destro del mouse selezionare Export to xml… 2. per i codici Taqman: selezionare la tabella riportata nella finestra Quantitation data (software BIO-RAD CFX Manager 1.6) o Quantification data (software BIO-RAD CFX Manager 3.0 e 3.1): la tabella si colora di azzurro. Con il tasto destro del mouse selezionare Export to xml… 3. salvare il file .xml nella cartella Export CFX presente sul disco fisso (C:\Real Gene\Export CFX). Non modificare il nome con cui viene salvato il file .xml 6 6.1 Analisi della seduta e genotipizzazione dei campioni Finestra Acquisizione dati Aprire il programma Real Gene 2.1 e selezionare il/i codice/i di interesse nella casella Assay Type: selezionare Melt Tm o Taqman e quindi spuntare il codice o i codici di interesse. Attenzione: non possono essere selezionati contemporaneamente codici che non condividono lo stesso profilo termico. Nel caso di selezione contemporanea di due kit incompatibili, il software segnala l’errore. 5 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Dopo aver spuntato i codici di interesse selezionare la data di lavorazione: se nello stesso giorno sono state effettuate più sedute, individuare il file di interesse sulla base dell’orario di inizio della seduta riportato nel campo Elenco delle sedute effettuate. Confermare la scelta con il tasto Elabora. Nella griglia sottostante compaiono quindi i nomi dei campioni analizzati nella seduta selezionata. I campioni possono essere associati a diversi simboli, come di seguito riportato: Stato del campione e risultato non validato, risultato riconosciuto validato, risultato riconosciuto non validato, risultato anomalo validato, risultato anomalo Icona Per poter continuare l’analisi è necessario inserire: a) il lotto del kit utilizzato tramite il tasto Seleziona lotti…: si apre una finestra (Gestione lotti) in cui è possibile selezionare un lotto già inserito in precedenza oppure crearne di nuovi utilizzando il tasto : una volta spuntato il lotto di interesse confermare la scelta con il tasto Seleziona lotto. Una volta selezionati tutti i lotti di interesse chiudere la finestra Gestione lotti con il tasto Chiudi b) l’identificativo analisi nella specifica casella. Premere quindi il tasto Conferma Selezionando un campione all’interno della griglia compaiono nella parte inferiore della finestra alcune informazioni relative al campione stesso: - sample selezionato: viene riportato il Sample Name riporato nella seduta CFX - stato: OK se non sono stati rilevati problemi; altrimenti viene riportato il problema individuato (per esempio, Presenza di valori Tm fuori dal range atteso) 6 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 - validato: sì se è già stata convalidata l’analisi; no se il campione non è ancora stato validato. Queste informazioni vengono aggiornate man mano che si procede nelle fasi di analisi. Attenzione: in caso di abbinamento della seduta con una Lista di Lavoro consultare il Paragrafo 9 prima di passare alla finestra Analisi e convalida. 6.2 Finestra Analisi e convalida Nella finestra Analisi e convalida vengono riportate le informazioni e i risultati dei campioni analizzati nella seduta esportata (riportati uno per pagina). Per passare da un campione all’altro utilizzare le frecce che si trovano a fianco del codice del campione. 6.2.1 Codici Melt Tm AA1397/48: CVD6 Multiplex Real Time Quando viene selezionato il codice AA1397/48 non viene inizialmente riportato il risultato di nessuno dei sei fattori analizzati dal kit: nella finestra Risultato analisi comparirà invece in rosso il messaggio Risultato non Valido - Ripetere l’esame. Spuntare con il mouse i fattori di interesse per far comparire la temperatura di melting dei picchi rilevati e la relativa genotipizzazione (casella Risultato analisi). E’ possibile selezionare tutti e sei i fattori contemporaneamente utilizzando la spunta verde a fianco della scritta Fattori. 7 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Nella casella Valori Tm al di fuori del range atteso viene segnalata (anche prima della selezione dei fattori di interesse) la presenza di eventuali picchi che però non rientrano nel range di Tm atteso. Per convalidare un picco con Tm al di fuori del range atteso, evidenziare il picco di interesse e convalidarlo con la spunta verde. Attenzione: di default il picco con Tm fuori range viene associato alla Tm1. Per l’associazione con la Tm corretta fare riferimento alla metodica del kit AA1397/48 (Tabella 2, Paragrafo: Analisi dei Dati). Per questo prodotto la presenza di tali picchi viene rilevata in due differenti modi: - selezione dei fattori di interesse in manuale: vengono segnalati i picchi con Tm fuori dal range atteso solo nella finestra Analisi e convalida - selezione dei fattori di interesse tramite Lista di Lavoro (Paragrafo 9): la presenza di picchi con Tm fuori dal range atteso viene segnalata tramite anche nella griglia dei campioni presente nella finestra Acquisizione dati. In questo modo è possibile individuare eventuali campioni problematici prima di utilizzare il comando . Una volta confermato, il picco con Tm fuori range viene spostato nella tabella Fattori (evidenziato tramite un asterisco) e il risultato della relativa genotipizzazione viene riportato nella casella Risultato analisi. La scritta Valori Tm al di fuori del range atteso cambia colore (da rosso a nero). In caso di necessità è possibile eliminare il picco in questione, dopo averlo selezionato, tramite il tasto . 8 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Attenzione: 1. Un’eventuale anomalia in un campione (assenza di picchi o presenza di picchi con Valori Tm al di fuori dal range) viene evidenziata solo in caso di selezione del fattore problematico (tramite spunta verde). Se il fattore problematico non viene selezionato, gli altri fattori restano comunque refertabili. 2. Se uno dei fattori selezionati non mostra la presenza di alcun picco, il risultato di tutto il campione viene invalidato. Nella griglia presente nella finestra Acquisizione dati il campione verrà quindi segnalato con il simbolo . 3. Non è possibile inserire tra i campioni analizzati con il kit AA1397/48 un eventuale controllo negativo (NTC, No Template Control). Cod NLM AA831, AA832, AA933, AA901, AA902, AA1034, AA981 e AA1181 Nella finestra Analisi e convalida il software mostra in automatico le Tm rilevate per ogni singolo campione e la corrispondente genotipizzazione. E’ possibile analizzare all’interno di una stessa seduta un campione con più codici contemporaneamente (purché condividano lo stesso profilo termico). In questo caso: - se un campione è stato analizzato con tutti i codici selezionati verrà riportato il risultato di tutti i fattori corrispondenti - se un campione non è stato analizzato con tutti i codici selezionati ma solo con alcuni di essi, verrà riportato solo il genotipo dei fattori di cui è stata effettuata l’analisi. Gli altri fattori verranno affiancati da un asterisco (* analisi non effettuata). Anche per questi codici il software Real Gene 2.1 segnala la presenza di picchi con Tm fuori dal range atteso. In questo caso: - la presenza di questi picchi anomali viene segnalata già nella finestra Acquisizione dati con il simbolo e nella descrizione dello Stato compare la scritta Presenza di fattori con Tm non validi. 9 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 - se un paziente è stato analizzato con più codici e solo uno di questi mostra dei valori di Tm non validi, il risultato degli altri fattori viene comunque riportato correttamente. Anche per tutti questi codici non è possibile inserire tra i campioni analizzati un eventuale controllo negativo (NTC, No Template Control). 6.2.2 Codici chimica Taqman Nella finestra Analisi e convalida vengono quindi riportati, campione per campione, i fattori analizzati, i fluorofori che mostrano un segnale positivo e la relativa genotipizzazione. I fattori non analizzati vengono segnalati tramite * (* analisi non effettuata). L'assenza di segnale in un campione viene indicata dal messaggio Nessun segnale rilevato (con l'indicazione del fattore problematico). Nella finestra Acquisizione dati il campione viene associato al simbolo e nella casella Stato viene riportata l’indicazione Presenza di fattori con nessun segnale rilevato. Attenzione: per i codici AA1370/48, AA1371/48 e AA1399/48 la mancanza di uno dei due fattori invalida il risultato di tutto il campione 10 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Per i prodotti Taqman è possibile inserire nella seduta un controllo negativo (NTC, No Template Control): prima di esportare la seduta dal CFX è necessario selezionare per questo campione la voce NTC nel menù a tendina relativo al Sample Type. E’ invece libera la scelta del Sample Name (es: acqua). Nella griglia dei campioni (finestra Acquisizione dati) l’NTC viene segnalato in grigio e non viene riportato nella finestra Analisi e convalida. Un campione NTC che mostra la presenza di segnali positivi viene sempre evidenziato in grigio ma viene affiancato dal simbolo a cui viene associato lo Stato: Campione NTC con presenza di segnali. 7 Campioni analizzati con più codici nella stessa seduta E’ possibile analizzare nella stessa seduta un campione con codici diversi purché condividano lo stesso profilo termico. In questo caso viene emesso un singolo referto riportante i risultati ottenuti con tutti i codici utilizzati a patto che il campione venga nominato sempre nello stesso modo (Sample Name nella seduta CFX). Nel referto vengono indicati anche i codici specifici utilizzati per il singolo campione e i rispettivi lotti abbinati. Nel caso in cui uno dei codici utilizzati abbia dato un risultato non refertabile (assenza di picchi o di segnali positivi), non viene invalidata l’analisi di tutto il campione ma è comunque possibile mantenere il risultato dei codici non problematici. Il fattore problematico viene segnalato nella finestra Analisi e convalida. 11 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 A questo punto è possibile: - eliminare la spunta dal fattore non refertabile in modo da mantenere le informazioni relative solo ai fattori non problematici - non eliminare la spunta dal fattore non refertabile e mantenere traccia nel referto del fattore di cui sarà necessario ripetere l’analisi Attenzione Per i codici Taqman sono consentiti unicamente questi abbinamenti: - AA1370/48 – AA1371/48 – AA1399/48 - AA780 – AA781 – AA785 – AA786 - AA1370/48 – AA785 – AA786 8 Inserimento manuale dei dati del paziente e delle note I dati relativi al paziente possono essere inseriti manualmente tramite la finestra Dati paziente (finestra Analisi e convalida): - il codice paziente deve essere obbligatoriamente inserito nel file .xml esportato dal CFX - cliccando il tasto è possibile aprire la finestra Gestione pazienti in cui si può inserire nome, cognome, codice fiscale e data di nascita (tramite il tasto ) - dopo aver inserito tutti i dati, utilizzare il tasto Conferma modifica e quindi il tasto Chiudi E’ possibile inserire informazioni nel campo Note (opzionale) per associare ad un determinato campione un commento informativo che verrà visualizzato nel referto singolo. Le note devono essere inserite nell’apposita finestra e convalidate tramite la spunta verde. 12 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 9 Importazione della lista di lavoro E’ possibile importare una lista di lavoro in formato .xml in cui sono riportati i dati del paziente e i fattori di cui è richiesta l’analisi. In particolare le informazioni che è possibile importare sono: - il codice o i codici analisi - il target analisi corrispondente al codice indicato. Nel caso di utilizzo del prodotto AA1397/48 devono essere specificati nella lista di lavoro i fattori di cui è richiesta l’analisi. In questo modo nella casella Risultato analisi verranno riportati automaticamente solo i risultati dei fattori richiesti - il codice paziente: deve necessariamente corrispondere al Sample Name indicato nella seduta del CFX - il nome, il cognome, il codice fiscale e la data di nascita del paziente. La lista di lavoro, una volta creata, deve essere salvata nella cartella C:\Real Gene\Esportazione Lista di Lavoro. Per richiamarla utilizzare il tasto Importa nella schermata Acquisizione Dati: - si apre una finestra in cui è possibile richiamare la lista di lavoro desiderata utilizzando il tasto a fianco di Importa da: - - nella finestra Elenco pazienti compaiono tutti i pazienti riportati nella lista di lavoro richiamata: vengono riportati anche il codice del paziente, il suo nome e cognome, la sua data di nascita e i codici di cui è richiesta l’analisi confermare con il tasto Importa pazienti nella finestra Esito importazione sono riportati tutti i pazienti di cui si vuole effettuare l’importazione con l’indicazione dell’esito dell’importazione stessa 13 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Se l’importazione è avvenuta correttamente compare il seguente messaggio: In caso contrario viene riportato accanto ad ogni paziente il problema riscontrato: - analisi già presente: se lo stesso codice paziente è già stato analizzato per il kit riportato nella lista di lavoro ma non sono presenti altre informazioni relative al paziente (nome, cognome o altro) - importazione non effettuata (codice già assegnato): se il codice paziente di cui è richiesta l’importazione è già stato precedentemente utilizzato. Una volta importato l’elenco pazienti, passare alla finestra Associa pazienti alla seduta in cui è possibile: - scegliere la seduta di Real Time a cui si vogliono associare i pazienti importati tramite l’elenco a tendina (le sedute vengono riconosciute tramite l’identificativo analisi) - selezionando Pazienti associati vengono mostrati tutti i pazienti associati alla seduta scelta - utilizzare il tasto Conferma modifiche e poi Chiudi per completare l’importazione dei pazienti Per informazioni aggiuntive su questa funzione è necessario contattare il supporto tecnico della Nuclear Laser Medicine. 10 Convalida dell’analisi e stampa del referto Una volta completata l’analisi del singolo campione, premere il tasto Convalida analisi. E’ possibile annullare la convalida di un campione tramite il tasto Annulla convalida. Solo nel caso di associazione con una Lista di Lavoro si attiva il tasto Convalida tutte le analisi: con questa funzione è possibile convalidare contemporaneamente i risultati di tutti i pazienti di una seduta segnalati con (risultato riconosciuto). Il comando Convalida tutte le analisi non è attivo sui campioni in cui viene segnalata la presenza di picchi con Tm fuori dal range. Per questi campioni è necessario passare nella finestra Analisi e Convalida e convalidarli manualmente, dopo aver accettato o meno i picchi anomali. 14 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Quando un campione è stato convalidato, è possibile generare il referto: 1. all’interno della sezione Analisi e convalida premere Stampa per generare un report dettagliato del singolo paziente. Il documento viene salvato in formato .pdf nella cartella C:\Real Gene\Analisi e denominato con il codice paziente 2. Se si vuole generare un report riassuntivo multiplo: - convalidare tutti i campioni di interesse - spostarsi nella finestra Acquisizione dati e premere Stampa. Anche in questo caso il report viene salvato nella cartella C:\Real Gene\Analisi denominato con l’identificativo analisi. 11 Esportazione dei risultati Una volta convalidati tutti i pazienti di una seduta è possibile esportare i risultati in formato .xml tramite il tasto Esporta. Si aprirà una finestra in cui è possibile: - selezionare tramite menù a tendina la data in cui è stata effettuata l’analisi da esportare. Nota bene: in questa finestra selezionare la data in cui la seduta è stata analizzata con il software Real Gene 2.1 e non la data in cui è stata effettuata la seduta - selezionare l’Identificativo analisi della seduta che si sta esportando - nella finestra Elenco pazienti verrà riportata la lista di tutti i pazienti convalidati: è possibile, in caso di necessità, non esportare un paziente riportato nell’elenco, deselezionando la spunta a fianco del nome - scegliere la cartella in cui salvare il file di esportazione (di default il file viene salvato nella cartella C:\Real Gene\Esportazione) e il formato (.xml oppure .csv) - utilizzare il tasto Esporta pazienti selezionati e poi Chiudi per completare l’esportazione 15 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 12 Ricerca e consultazione dei referti 1. Sia dalla finestra Acquisizione dati che dalla finestra Analisi e convalida premendo il tasto Ricerca si apre la seguente finestra: 2. Inserire negli appositi campi i parametri utili alla ricerca e premere Avvia ricerca: il risultato viene visualizzato sulla destra 3. Evidenziare il file desiderato e premere Apri o Stampa: pulsante Apri: chiude la finestra di ricerca ed apre la seduta selezionata pulsante Stampa: apre il referto del campione selezionato Attenzione: a) vengono mostrati nel menù a tendina dell’Assay Type solo i codici Melt Tm o solo i codici Taqman a seconda del tipo di chimica selezionata nella finestra Acquisizione dati b) utilizzando la finestra Lotto è possibile visualizzare il risultato della combinazione tra le informazioni riguardanti l’Assay type e il lotto del kit. Non è attiva la ricerca basata solo sull’Assay type 13 Backup di tutti i dati in archivio 1. 2. 3. 4. Nella barra strumenti premere il tasto Utilità Selezionare Salva archivio Specificare il percorso dove salvare il file Premere Conferma 16 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 14 RISOLUZIONE DEI PROBLEMI Contattare: Nuclear Laser Medicine: 02/952451 Per problemi in fase di installazione chiedere del Supporto Informatico. Per problemi di interpretazione chiedere di uno Specialista di Prodotto. 17 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017 Codice Conformità europea Dispositivo medicodiagnostico in vitro Consultare le istruzioni per l’uso 18 DO022 – NLM 7794 – ver. 23/02/2017