ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-254055.06
Rev.: April 2013
BD XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar)
USO PREVISTO
BD XLD Agar è un terreno differenziale e moderatamente selettivo per l'isolamento e la
differenziazione di patogeni enterici Gram-negativi (Salmonella e Shigella) da campioni clinici,
particolarmente adatto per l'isolamento di Shigella spp.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
L'agar XLD è stato allestito da Taylor per facilitare l'isolamento e l'identificazione di patogeni
enterici, in particolare la Shigella.1 I patogeni vengono differenziati non solo dai non patogeni
fermentanti il lattosio, ma anche da numerosi non patogeni che non fermentano il lattosio o il
saccarosio. Il terreno, inoltre, è stato allestito per stimolare la crescita di Shigella,1 che spesso
in altri preparati non si sviluppa per la presenza di inibitori tossici. I risultati ottenuti da
numerose valutazioni cliniche hanno confermato l'efficacia alquanto elevata dell'agar XLD
nell'isolamento primario di Shigella e Salmonella.2-6 L'agar XLD è uno dei terreni usati per i test
sui limiti microbici della USP e EP. 9, 10
L'agar XLD è un terreno differenziale e selettivo che utilizza l'estratto di lievito come fonte di
nutrienti e vitamine e il desossicolato di sodio come agente selettivo per inibire i microrganismi
Gram-positivi. Lo xilosio viene aggiunto al terreno perché è fermentato da praticamente tutti gli
enterobatteri ad eccezione delle Shigellae, e ciò consente di differenziare le specie Shigella. La
lisina viene aggiunta per differenziare le Salmonellae dai batteri non patogeni: in assenza di
lisina, infatti, le Salmonellae fermentano lo xilosio, diventando indistinguibili dalle specie non
patogene. Le salmonelle, una volta esaurito lo xilosio, attaccano la lisina per mezzo dell'enzima
lisina decarbossilasi, riportando il pH su valori alcalini come nella reazione della Shigella. Per
evitare un processo analogo da parte dei coliformi lisina-positivi, vengono aggiunti lattosio e
saccarosio per produrre un eccesso di acido.1
Per migliorare la capacità di differenziazione del preparato, si aggiunge un sistema di indicatori
di H2S a base di tiosolfato di sodio e citrato di ammonio ferrico che rivela la presenza di solfuro
di idrogeno, con conseguente formazione di colonie nere al centro. I produttori non patogeni di
H2S non decarbossilano la lisina ma provocano la reazione acida che impedisce l'annerimento
delle colonie, riscontrabile solo con pH neutro o alcalino.1
REAGENTI
BD XLD Agar
Formula* per litro di acqua purificata
Xilosio
3,5 g
L-lisina
5,0
Lattosio
7,5
Saccarosio
7,5
Cloruro di sodio
5,0
Estratto di lievito
3,0
Rosso fenolo
0,08
Desossicolato di sodio
2,5
Tiosolfato di sodio
6,8
Citrato di ammonio ferrico
0,8
Agar
13,5
pH 7,4 ± 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
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PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre in ambiente aerobico a
35 – 37 °C per 18 – 24 h.
Ceppi
Risultati della crescita
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Crescita da buona a eccellente, colonie rosse,
nere al centro
Salmonella Abony DSM 4224
Crescita da buona a eccellente, colonie rosse,
nere al centro
Shigella flexneri ATCC 12022
Crescita da buona a eccellente, colonie rosse
Shigella sonnei ATCC 25931
Crescita da buona a eccellente, colonie rosse
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Inibizione da parziale a completa
Escherichia coli ATCC 25922
Inibizione da parziale a completa, colonie da giallo
ad arancione
Proteus mirabilis ATCC 12453
Crescita; colonie rosa, nere al centro, sciamatura
inibita
Non inoculate
Rosso
PROCEDURA
Materiali forniti
BD XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar) (piastre impilate Stacker 90 mm).
Microbiologicamente controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Terreno differenziale selettivo per l'isolamento di Salmonella e Shigella da campioni fecali o
tamponi rettali di pazienti con sospetta infezione enterobatterica o da materiali non clinici (v.
anche PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).
Procedura del test
Strisciare il campione non appena viene consegnato in laboratorio. La piastra strisciata è
utilizzata prevalentemente per isolare le colture pure dai campioni contenenti flora mista. In
alternativa, se il materiale in coltura proviene direttamente da un tampone, rotolare il tampone
su una piccola area del bordo e strisciare da questa zona inoculata.
Inoculare anche un terreno meno selettivo, come BD MacConkey II Agar, per agevolare
l'isolamento se la popolazione di Gram-negativi è ridotta e fornire indicazioni su altri
microrganismi presenti nel campione.
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Incubare le piastre, schermate dalla luce, a 35 ± 2 °C per almeno 18 – 24 h. Possono essere
necessarie 48 h di incubazione prima che le colonie su agar XLD raggiungano la piena
colorazione.
L'agar XLD può essere usato come terreno per le sottocolture del brodo Selenite-F.
Risultati
La tipica morfologia delle colonie è la seguente:
Organismi
BD XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar)
E. coli
Grandi, piatte, gialle. Alcuni ceppi possono essere
inibiti.
Enterobacter/Klebsiella
Mucoidi, gialle.
Proteus
Da rosse a gialle. Gran parte dei ceppi con zone
centrali nere.
Salmonella, H2S-positiva
Arancioni con zone centrali nere
Shigella, Salmonella, H2SRosse
negative
Pseudomonas
Rosse
Batteri Gram-positivi
Da nessuna crescita a lieve crescita
PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD XLD Agar è usato per l'isolamento di Salmonella e/o Shigella da campioni di feci umane o
tamponi rettali ed è particolarmente adatto per l'isolamento di Shigella.7,8
Un solo terreno difficilmente può isolare tutti i patogeni contenuti in un campione. Pertanto,
inoculare con il campione altri terreni per isolare Salmonella e/o Shigella ed eventualmente altri
patogeni enterici.
Alcuni ceppi di Shigella possono richiedere un periodo di incubazione di 42 – 48 h.
Benché sia possibile eseguire alcuni test diagnostici direttamente sul terreno, per
un'identificazione completa è necessario effettuare test biochimici e, all'occorrenza,
immunologici usando colture pure. Consultare le relative voci della bibliografia.3,4,7
BIBLIOGRAFIA
1. Taylor, W.I. 1965. Isolation of shigellae. I. Xylose lysine agars; new media for isolation of
enteric pathogens. Am. J. Clin. Pathol., 44:471-475.
2. Taylor, W.I., and B. Harris. 1965. Isolation of shigellae. II. Comparison of plating media and
enrichment broths. Am. J. Clin. Pathol. 44:476-479.
3. Taylor, W.I., and B. Harris. 1967. Isolation of shigellae III. Comparison of new and
traditional media with stool specimens. Am. J. Clin. Pathol. 48:350-355.
4. Taylor, W.I., and D. Schelhart. 1967. Isolation of shigellae. IV. Comparison of plating media
with stools. Am. J. Clin. Pathol. 48:356-362.
5. Taylor, W.I., and D. Schelhart. 1968. Isolation of shigellae. VI. Performance of media with
stool specimens. Appl. Microbiol. 16:1387-1393.
6. Pollock, H.M., and B.J. Dahlgren. 1974. Clinical evaluation of enteric media in the primary
isolation of Salmonella and Shigella. Appl. Microbiol. 27:197-201.
7. Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003. Escherichia,
Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and
R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
8. Kist, M., et al. 2000. Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann
(eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
9. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. 2009. The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary
27--2009. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA
10. Council of Europe, 2008. European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia
Secretariat. Strasbourg/France
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CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD XLD Agar
N. di cat. 254055
N. di cat. 254090
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
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D-69126 Heidelberg/Germany
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