Tecniche di estrazione del DNA genomico e plasmidico e applicazioni
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Osservazioni al microscopio ottico e a fluorescenza di cellule e tessuti JC-1 •MTS Saggio di vitalità cellulare colorimetrico che sfrutta la riduzione del composto mts, attraverso enzimi presenti nelle cellule vive. Questo comporta la formazione di un prodotto colorato la cui intensità è proporzionale alla concentrazione di cellule vitali. •MTS Saggio trypan blue Cellula morta Saggio per valutare la differenza fra cellule vive e cellule morte, in quanto il colorante (trypan blue) penetra esclusivamente nelle cellule morte che hanno la membrana sfaldata. •Sezioni di cervello di topo Colorazione dei nuclei in sezioni di cervello di topo con ematossilina che da ai nuclei una colorazione più intensa ed eosina che colora con una gradazione minore il citoplasma. Realizzato da : - Francesco Lipani - Daniele Rubino controllo H2O2 Attraverso la visione al microscopio a fluorescenza notiamo come le cellule vengano danneggiate dopo un trattamento con acqua ossigenata per 20 minuti. Le cellule non trattate hanno una colorazione rossa (controllo), al contrario di quelle trattare con H2O2 che acquisiscono la sonda JC-1 assumendo una colorazione verde. Ciò avviene perché l’acqua ossigenata produce stress ossidativo sulle cellule invertendo il potenziale di membrana, aprendo i pori del mitocondrio permettendo l’ingresso JC-1 •Hoechst Dopo lo stress ossidativo indotto dall’esposizione delle cellule ad H2O2. Le cellule vengono fissate e poi trattate con Hoechst che mostra la differenza di forma tra i nuclei sani e i nuclei danneggiati, i quali risultano condensati in seguito a un processo di morte cellulare. Cellule non trattate Cellule trattate
