GRAM reazione con KOH e saggio catalasi

Colorazione di GRAM con KOH
È possibile distinguere i batteri Gram-negativi da quelli Gram-positivi con un test rapido che
utilizza una soluzione alcalina per studiare la resistenza delle due diverse pareti cellulari. Il test
della colorazione di GRAM consiste nel porre una goccia di soluzione di KOH al 3% su un vetrino
e, prelevata una colonia da una coltura pura, la si sospende con un movimento circolare nella
goccia. A questo punto si può osservare la positività del test se, sollevando l’ansa, si forma un
filamento vischioso di soluzione. La sospensione batterica composta da Gram-negativi assume tale
consistenza a causa della rottura della parete cellulare e della dispersione del DNA. Parallelamente
il risultato del test sarà negativo se, alzando l’ansa, non si formerà nulla tra la sua estremità e la
sospensione batterica, rilevando pertanto la presenza di batteri Gram-positivi.
Saggio della catalasi
Questo saggio permette di rilevare la presenza dell’enzima catalasi che catalizza la distruzione del
perossido di idrogeno (H2O2) secondo la reazione:
2H2O2
2H2O + O2
A tal fine, dopo aver prelevato una colonia batterica da una coltura pura la si stempera in una goccia
di (H2O2) al 3%. La reazione sarà positiva se si forma una schiuma bianca, dovuta dalla liberazione
d’ossigeno secondo la reazione di cui sopra; sarà negativa se non si formano bolle.