Prof. Franco Brindani ! " # " 6 # 9# # # ! 6 :# /''. $ ( & / 0 $ 1 ( * +,%&''''') $ + * ./%&''''') 3 $&- ..) $&/ 2/) $- 42) - 0 1 . 4 %&'''' ) $/ 5.) 60 &.2 &.2 $& '4) $'++) 4 7 $'+4) 2 $'+') , 8( $'/2) California, Colorado, New York, Tennessee, Minnesota, Oregon, Maryland, Connecticut, Georgia, New Mexico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acillus cholerae-suis (Salmon) 1900: genere Salmonella (Ligniéres) 1954: Schema antigenico (Kauffmann-White) Incremento salmonellosi minori – Diminuzione sindromi tifoidi Struttura antigenica Antigene O: numeri arabi 1-67 (46) Antigene H: Fase 1 – lettere minuscole (a, b, c..), oltre la 26°, lettera z con numeri da 1 a 83 (pedice) Fase 2 – numeri arabi (1-12) o lettere minuscole Fase 3 - pochissime [ ]: antigeni non sempre prodotti o non sempre rilevabili _ antigene comune a molti e instabile ! % " & # $ " ' $ ) $ # )))! )+ + + ), 2 ( " ! - ( * ( ,. ! / ! ( * ( # 3 *) )) ))) $ ! /0 ,. 1 0 . ! ) ( # $ 4 5 2 ( ( ( 6 * / $ ( ( , ( . # !! # . ! : 6:# # # ( =# 0# = ( ° * ° B* ( ? ;* ( " : 0 ( " ! % *" * C ?D3 6# = E # $42) / .'' B $+.) Agar SS SS + E. coli SS + E. coli e Salmonella Agar Hektoen Hektoen + Escherichia coli Hektoen + Escherichia coli e Salmonella IDENTIFICAZIONE E CONFERMA B< F 60 61 3 QUALI ALIMENTI? : 88# 8 $: : 9 3 " =# # ( 6# ) * .-G0 "" " ( $ > " )* !.2 H -?4 !4'H ,?&' # I " 3 # " " 2'G0 B* ( # ( " ;* '5& -& " .' " '5+ D =# # @ J 6#0 : #6: K " # (" B B H .'$ ( # 6# (" " # : &.2) " * * " " . . -/ /' * " &'?&. EPIDEMIOLOGIA 1) SALMONELLE CHE COLPISCONO SOLO L’UOMO: S. TYPHI, S. PARATYPHI A, B, C. 2) SALMONELLE PARTICOLARMENTE ADATTATE AD UNA SPECIE, MA PATOGENE ANCHE PER L’UOMO: S. GALLINARUM (POLLO) S. DUBLIN (BOVINO) S. CHOLERAESUIS (SUINO) S. ABORTUS EQUI (EQUINO) S. ABORTUS OVIS (OVINO) 3) SALMONELLE NON OSPITE SPECIFICHE: LA > PARTE DEI SIEROTIPI S. TYPHIMURIUM, S. ENTERITIDIS, S. INFANTIS, S. DERBY, S. SENDAY 35 SIEROTIPI = 90% DEI CASI RESISTENZA AMBIENTALE: 3-30 mesi PATOGENICITA’ 1) TIFO (S. TYPHI) COLPISCE L’UOMO E I PRIMATI INCUBAZIONE: 8-15 giorni FEBBRE: 5-35 giorni SETTICEMIA, ASCESSI, MORTE 2) PARATIFO (S. PARATYPHI A, B, C) INCUBAZIONE: 24-48 ore FEBBRE: 5-10 giorni VOMITO, DIARREA, CEFALEA PROLUNGATA ELIMINAZIONE BATTERI 3) SALMONELLOSI MINORI INGESTIONE DI 107-108 CELLULE SINDROME GASTOENTERICA INCUBAZIONE: 12-36 ore DURATA: ALCUNI GIORNI S. TYPHIMURIUM: MORTALITA’ 1-2% ELIMINATORI ASINTOMATICI: 5% CONTROLLO ELIMINAZIONE COMPLETA: IMPOSSIBILE EDUCAZIONE SANITARIA RIGOROSA IGIENE PERSONALE MANTENIMENTO CATENA DEL FREDDO 0: # : 6# ? 6 0# # 0 @ $-,, ( ) 3 * #$ → % &#'# '& '&## &'#&##&& % #$(→ % & &'###' #& #' #& #&'#& % 2+2- 2.24 222, 25 ,+ ,- 2/ ,. +4 Ciclo di amplificazione: ° ))! (%% ° % ° % (%% ° ° (%% &''' Master Mix * µ ! + ,-.* * (/ 0'+ + 1 ' 2+ 1" ( 1 1 34 µ .'' +'' DNA templato: ( µ Marker: Marker + ,( 5 65 7" # ) 8 -,, 6 @ $&,+( ) 3 61 3 * 9) → % #'#& #' '''# #&'' % 9) → % & '& ## '&''# #&&#'#'& % 0 " ° ))! (%% ° % ° /- /. /4 /2/, /5+'+& +/ ++ +- +. ! +&-2 % (%% ° (%% > * + ,-.* * (/ 0'+ + 1 ' 2+ 34 µ 1" ( 1 ° µ ! 1 &.' .' !(µ ! < !7 5 7" # ) 8 &,+ ? ! # 66 6 L : 8 :# # 6: 6 * &'4?&', 0 $ M " ) @ ? ?# $ " ) = @ @ K $ " ) ( 2'?,'G0 ( @ 3 " * N ! $ 0 ( ) &'' 0 &'?&'' 0 61 3 03 03 @ B 3 ( B O&' ( 61 3 ( &'' &?&' < ; &'?&'' &'?&'' = /.?.' < %P : ( ; O-. O-. 66 :#!#8# : 6 ( 8 66 :# 0 !# # 0 9# : 9 $ 0: # 0 : 3 % 3Q ) " 66 :# 0 !# # 0 9# : $ :R " " # !# 0 0!) 00 # !@ 9# : " # ? 0 "" " ? ? " " @ @ @ 3 @ I " " " $.'?5'C()* $ ! ( 61 3 0 * : & 03 0! $4?, C() - ) 6 @ 3 $,5& ( ) : ! 7+:,(→ % &#''' ''&#''##'######''## % 7+:, → % ' #' & # &' ###&&## ? % 0 " ° ))! %% ° % ° ,& ,/ ,+,- ,2,5,. ,5 5'5& 5.5 . / 45 ! (% +&-2 %% ° ° % 5'' ,'' µ ! > * + ,-.* * (/ 0'+ + 1 ' 2+ 1" ( 1 1 34 µ .' ! ( µ (!( ! < ! +, 56 5 7" ,5& " &) # * &. $O /) " @ 6 @ " 3 @ I 3 @ J $ I " $ " * ( ) ) 6 @ $/,- ( ) 3 * 7'( → % '&###''#' & # &'' &&& ## % 7'( (→ % ' #' & # &' ###&&## ; % 0 " ° ))! %% ° % ° && &- &4 +& +++, +5-'-5.'.& .2 ! % %% ° %% ° &''' µ ! > * + ,-.* * (/ 0'+ + 1 ' 2+ 1" ( 1 1 34 µ +'' &'' !(µ ! < ! + ,( 56 5 7" /,- /) 3 % 3 Q $/ +C()* $ " " @ ) @ +' " 3 + @ 3 J S I 3 < @ 6 @ $/55( ) 3 3 * 5→ % #'& ###& &# #'&## & % +, +5-'-5.'.& .24'4- 4.M 4. ++ ,→ % &'#' &# # # &#'&&'' % 0 " ! &''' ° % ))! +'' ° %% %% ° %% ° &'' ° % µ ! > * + ,-.* * (/ ' 2+ 34 µ 0'+ 1 + 1" ( 1 !(µ ! < ! + ,( 5 65 1 /55( 7" 6# # 6# 0 ?: #6 9 @4' $ 0 ( ) :# 0# ( # ( " > " ! &552 $ " ( @ " 0 3 ) T 3 I ( 3 ( "" ( :# 0# 61 3 # = 6# # " :6 6 :#!#: #6 9 * !6/5 !6/'- !6&'* !6 5 !6&' !6&/ 6- 6/& 6& 0Q # # 9# : #6 9 " I $ " " 00 # " " " # @ !#: " #6 9 ( ( " ( ) Basi genetiche della resistenza aspecifica in S. Typhimurium Mutazioni puntiformi in geni regolatori che portano: 1. Alla sovraespressione di geni codificanti per pompe ad efflusso attivo appartenenti alla famiglia Resistance Modulation cell Division (AcrAB) Basi genetiche della resistenza aspecifica in S. Typhimurium 2. All’inibizione di geni codificanti per porine di membrana (OmpF) Basi genetiche della resistenza specifica in S. Typhimurium Penicilline: gene pseI localizzato in gene cassettes/integroni geni blaTEM-type localizzati in trasposoni Aminoglicosidi: Aminoglicosidi Tetracicline: gene ant(3”)-Ia localizzato in gene cassettes/integroni gene strA localizzato in trasposoni geni tet(A)-tet(E) localizzati in trasposoni su plasmidi gene tet(G) localizzato nel cromosoma Chinoloni e fluorochinoloni: mutazioni puntiformi nel gene gyrA Meccanismi di resistenza in S. Typhimurium ß-lattami Tetracicline GENOME ALTERAZIONE DELLA PERMEABILITA’ DI MEMBRANA Aminoglicosidi TARGET MODIFICATION Chinoloni e fluorochinoloni 6# # 6# 0 ?= C 6# : # 6 6# $- # U ?: $0 * ? $ ? $ > 6# # 6# 0# ) 3 ) 61 3 !6&'0 6) 61 3 !6&'" 66 0 ) * 0 6 6 # 61 3 .&V !6&'- 6# # 6# 0 ?: # 6 9 6:# 0#$ !# 8: :? : ) 80 70 ( 60 50 40 +5 .V c 30 20 10 0 +. .V ? ( ? 0 $ 0 & 3 $ 0 / 3 $ ! $&%&2) $&%&) $&'%&2) $5%&') * -- $&-%/.) 61 3 (1$+%&4) $5%&-) ? 1$/%&+) 1$&%/) 8 3 ; $2%2) ? ( ? :) 6 ) :) 61 3 0 : $/%/) $/%/) $/%/) $&%+) ? B ( ( 0 # ? $&%&) $&%&) ? ( B ( $&%&) $&%,) $&%&) $&%&) ? # $&%&) ( ? 0 $ 0 + 3 ) $ 6 * 4, 0 $ 6 61 3 ) *2 0 $ $.%&2) 61 3 $5%/.) ! (1$&+%&4) 1$&&%&+) # $2%,) $4%5) # $&%&) $+%.) $/%+) < 1$4%4) 3 $+%+) B $&%&) . ) $/%/.) $+%5) $/%.) $&%&2) : $-%.) ? 1$2%&&) $-%2) # ? # $&%&) ? $&%/) ? ? ? ? ? ? $&%&) )