Diapositiva 1

Con la tecnica della PCR si può amplificare in
modo specifico e ripetitivo qualsiasi segmento di
DNA compreso tra due particolari sequenze
nucleotidiche.
La sua importanza risiede proprio nel
riuscire ad individuare facilmente particolari
sequenze nella quantità desiderata.
La PCR avviene grazie ad uno strumento detto
termociclatore che costituisce un’importante
innovazione per i biologi. È formato da una piastra
riscaldata in cui vengono inseriti i campioni di DNA.
Per realizzare il meccanismo della PCR si necessita di:
-Nucleotidi trifosfati come ATP e GTP;
-Primer;
-TAQ (una polimerasi estratta da un termofilo, il Termus
Aquaticus, in grado di non denaturarsi ad elevate temperature;
-Buffer (tamponi necessari per la reazione di elongazione).
La PCR avviene in tre fasi:
-Denaturazione (a circa 90°);
-Appaiamento (a circa 60°);
-Allungamento (40°).
La corrente elettrica fa muovere le molecole di DNA, cariche
negativamente, attraverso la matrice porosa del gel che rallenta le
molecole più grandi durante il loro percorso verso l’elettrodo positivo.
Un colorante speciale rende visibili le molecole di DNA che si
raggruppano in posizioni diverse nel gel a seconda delle loro
dimensioni.
- In campo medico:
La PCR viene utilizzata per la
diagnostica microbiologica e per
l’evidenziazione di tumori liquidi
quando non sono evidenziabili con
altri metodi.
Prima della nascita: si
utilizzano cellule fetali
ottenute attraverso la
villocentesi o l’amiocentesi,
sono necessari anche
tamponi buccali della madre
e del presunto padre. Se il
profilo genetico del padre
presunto e del feto
differiscono per due o più
caratteristiche genetiche,
l’esclusione è certa, se
invece i due profili
concordano vi è
un’attribuzione della
paternità,
Dopo la nascita: si utilizza il
consueto esame del DNA tramite
PCR prelevando delle cellule con
una spatola dalle guance del
neonato e del padre putativo.
Si utilizza la rivelazione degli amplificati, sono frammenti di DNA della
medesima lunghezza, nota perché determinata dalla maniera in cui sono
stati costruiti i primers. La loro rivelazione viene eseguita attraverso
elettroforesi su gel di agarosio.
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There was a time when to amplify DNA,
You had to grow tons and tons of tiny cells.
Then along came a guy named Dr. Kary Mullis,
Said you can amplify in vitro just as well.
C'era un tempo quando per amplificare il DNA
dovevi coltivare tonnellate di delicate cellule.
Just mix your template with a buffer and some Poi ci fu un ragazzo di nome Dr. Kary Mullis,
che diceva che si poteva fare in vitro.
primers,
Nucleotides and polymerases, too.
Basta mescolare lo stampo col tampone e
alcuni primer,
Denaturing, annealing, and extending.
Well it’s amazing what heating and cooling and nucleotidi e anche polimerasi.
heating will do…
Denaturando, riscaldando ed estendendo.
È sorprendente cosa scaldare, raffreddare e
PCR, when you need to detect mutations.
riscaldare possa fare…
PCR, when you need to recombine.
PCR, when you need to find out who the daddy is.
PCR, quando devi trovare mutazioni.
PCR, when you need to solve a crime.
PCR, quando devi ricombinare.
PCR, quando devi scoprire chi è papà.
PCR, quando devi risolvere un crimine.