Le malattie infettive trasmesse da vettori
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Relazione Dr. Giulio Pisani Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’impatto l impatto sul sistema donazioni/trasfusioni Diagnosi di laboratorio Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Febbre Mal di testa Dolori muscolari Nausea, Vomito g Linfonodi ingrossati Rash cutaneo Febbre Confusione Convulsioni Debolezza muscolare Perdita vista Intorpidimento Paralisi Stato comatoso Ricerca IgM nel - Siero - CSF Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 IgM • Le IgM compaiono a partire dall dall’ottavo ottavo giorno dall dall’infezione infezione • Le IgM compaiono 3-8 giorni dopo la sintomatologia • Presenti per almeno 30 – 90 giorni • Raramente presenti anche fino a 12 mesi ed oltre ASSENZA IgM prima i d ll’ tt dell’ottavo giorno i fine della fase acuta PRESENZA E id Evidenza di una infezione i f i recente t Possibile cross-reattività Ripetere Ri t il test t t dopo d 7 14 7-14 giorni Testt di conferma T f d da eseguire mediante test neutralizzazione in vitro Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Febbre Mal di testa Dolori muscolari Nausea, Vomito g Linfonodi ingrossati Rash cutaneo Febbre Confusione Convulsioni Debolezza muscolare Perdita vista Intorpidimento Paralisi Stato comatoso Ricerca IgG nel - Siero Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 IgG • Le IgG compaiono qualche giorno dopo le IgM • Presenti per almeno 1 – 2 anni ….ed oltre ASSENZA Prelievo in periodo precoce I G IgG Ripetere il test dopo 7-14 giorni Da associare con le IgM Evidenza di una infezione PRESENZA passata Possibile cross-reattività Ripetizione dopo 7-14 giorni per valutare un rialzo Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Possibile cross cross-reattività reattività Usutu Virus Virus Febbre gialla g Virus Encefalite giapponese Virus encefalite di St. Louis Virus Dengue Plaque-reduction neutralization tests PRNT Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Isolamento su coltura Cellulare Febbre Confusione Convulsioni Debolezza muscolare Perdita vista p Intorpidimento Paralisi Stato comatoso Febbre Mal di testa Dolori muscolari Nausea vomito Linfonodi ingrossati rash cutaneo Ricerca Campione raccolto in condizioni sterili in terreno con antibiotici e conservato a +4°C per un massimo di 24 ore del Virus plasma, siero, CSF Ricerca del genoma virale Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 da 2–3 giorni a 14–18 14 18 giorni post-infezione Efficacia TEST SIEROLOGICI vs MOLECOLARI Studio condotto tra il 1999-2000 Pazienti New York • 95% IgM + nel CSF • 90% IgM + nel siero entro 8 giorni dai sintomi • 55% PCR + nel CSF • 10% PCR + nel siero West Nile virus surveillance and control: an update for healthcare providers in New York City. New York Department of Health. City Health Information. 2001;20. Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Ricerca del genoma virale i l NAT WNV RNA Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 anno 2002 23 casi di trasmissione virale WNV attraverso il sangue g durante la stagione epidemica Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Trasfusione Sangue da 63 donatori WNVD Donatore Organi Febbre da WNV anno 2002 WNVD WNVD Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 La Food and Drug Administration (FDA) richiese ai produttori di kit di sviluppare prima possibile un saggio molecolare per rilevare il WNV RNA nel sangue Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Giugno 2003 disponibili due kit diagnostici che vennero impiegati in ambito di investigational g new drug g ((IND)) nello screening g del sangue durante la stagione esiva 2013 Giugno Dicembre 2003 6 milioni di unità analizzate. 818 confermate positive WNV RNA Evitate 1000-1500 potenziali trasmissioni di WNV attraverso la trasfusione Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 virus IgG IgM rtPCR MP 6 240 cp/mL 160 cp/mL TMA MP 16 40 cp/mL rtPCR ID 10 cp/mL TMA ID Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 .. rare transfusion-transmitted infections could still occur from the transfusion of units with low level viremia that would not be detected by MP NAT… Busch MP et al. Emerg g Infect f Dis 2006 Giugno Dicembre 2003 6 milioni di unità analizzate. 6 donazioni sfuggite 818 confermate positive WNV RNA Retrospective studies of samples from donors in epidemic areas established that a substantial fraction (20% - 30%) of WNV RNA–positive blood donations had very low- level viremia that was detectable by ID-NAT but not by MP-NAT Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Strategia g del “trigger” gg ID Sensibilità 40 cp/mL 6 MP Sensibilità 240 cp/mL ID Sensibilità 10 cp/mL 16 MP Sensibilità 160 cp/mL Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 1 MP positivo alla NAT WNV ------Trasmissione all’uomo di WNV nella popolazione Se il numero delle infezioni 1 caso ogni 1.000 abitanti nelle aree rurali non vengono più iù identificati id tifi ti 1 caso ogni 2.500 abitanti nelle aree urbane nella popolazione scende o e donatori positivi alla NAT per WNV nei successivi 7 gg, si può ritornare a MP6 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 4 MP positivi alla NAT WNV ------Trasmissione all’uomo di WNV nella popolazione 1 caso ogni 1.000 abitanti Se non vengono più identificati donatori positivi alla NAT per WNV nei successivi 7 gg, si può ritornare a MP6 o MP16 2004 : un caso di trasmissione WNV (il MP6 era negativo) 2006 : due casi di trasmissione WNV da uno stesso donatore (emazie e plasma) Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Dal 2003, circa 3.750 Unità di Sangue NAT positive per il WNV sono state identificate e rimosse total 35,153 WNV human cases WNV reactive units 3,762 Un totale di 12 casi di trasmissione di WNV con il sangue sono stati identificati Fatal WNV infection after probable transfusion-associated transmission — Colorado, 2012 MMWR / August 9, 2013 / Vol. 62 / No. 31 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Infezione umana da WNV rientra tra le malattie notificabili Commission Decision 2009/312/EC 2009/312/EC. Definizione di caso infezione umana da WNV Commission Decision of 28/IV/2008 28/IV/2008. Criteri Clinici Qualsiasi persona con febbre o almeno Encefalite o Meningite Criteri Diagnostici - Isolamento virale dal sangue o liquido cerebrospinale - rilevamento genoma virale dal sangue o liquido cerebrospinale - presenza di IgM anti-WNV nel liquido cerebrospinale - presenza di alto titolo IgM anti-WNV, anti WNV presenza di IgG e conferma mediante neutralizzazione in vitro Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 NAT per WNV RNA Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 ++ + biglia magnetica + + + + - - - - - - - - - Fase di estrazion • Lisi della particella virale • Rilascio del genoma virale • legame a biglie magnetiche • lavaggi biglia magnetica Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Fase di Amplificazione Fase di Rilevazione Sonda TaqMan Valore soglia Crossing-point Threshold cycle Threshold-cycle Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 TMA Transcription Mediated Assay Fase di Amplificazione Fase di Rilevazione 16000 14000 probe 12000 EA RNA target chemiluminescenza 10000 8000 6000 4000 RLU 2000 0 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV RNA NAT Sensibilità Analitica 95%LOD Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV RNA NAT: Sensibilità Analitica 95% Limit of Detection WNV Lin 1 ~ 40 cp / mL1 Real time PCR Health Canada reagent HC-SC, WNV Nat Ref 001/03 Saldanha J Transfusion 45, 2005 ~ 10 cp / mL2 TMA 1) Saldanha et al Transfusion 48, 2008 2) Linnen et al J Med Virology 79 2007 WNV Stock, Stock NY 2001-6263 Lot 302142 FDA WNV Reference Panel CONFIRMED Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV RNA NAT: Sensibilità Analitica 95% Limit of Detection WNV Lin 2 ~ 5 cp / mL1 Real time PCR The WNV RNA qualification ~ 20 cp / mL2 TMA panel QWN701 1) Saldanha et al Transfusion 48, 2008 2) Linnen et al J Med Virology 79 2007 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV RNA NAT Specificità Analitica Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Cross-reattività VIRUS Real time PCR TMA Japanese Encephalitis Virus SI no Murray Valley encephalitis virus SI no Saint Louis encephalitis virus SI no Kunjin virus SI SI Yellow fever virus non riportato no Dengue g virus non riportato p no SI 2 SI 1,2 Usutu virus 1) Gaibani P et al. al J Clin Microbiol 2010; 48: 3338 3338-9 9 2) Pisani G et al, Blood Transfusion 2010; 10:515-20 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV screening g in Italia Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 WNV screening i in i Italia It li Anno n. donatori NAT + n. donazioni testate Casi WNVD 2009 2 59.815 18 2010 6 118.295 3 2011 4 119.345 14 2012 14 116 255 116.255 28 2013 19 284.564 44 2014 1 Non riportato 21 Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 IgM IgG RNA: ~ 9.000 cp/mL IgM negativa IgG negativa donazione Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 IgM IgG RNA: << 100 cp/mL IgM positiva IgG negativa donazione Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Su 9 donazioni positive alla NAT IgM g e IgG g negative g IgM e/o IgG positive Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014 Grazie Corso E.C.M. Le malattie infettive trasmesse da vettori e l’idoneità alla donazione di sangue e di emocoponenti alla luce delle novità normative” San Donato Milanese, 8 novembre 2014
