Page 1 of 2 CD127 FITC Noto anche come: Interleukin-7 Receptor alpha, IL-7Ra Catalog Number(s): 9011-1278-025 (25 tests), 9011-1278-120 (120 tests) Profili di fluorescenza di normali linfociti del sangue periferico umano non colorati (istogramma blu) o colorati con CD127 coniugati con FITC (istogramma viola). Informazioni sul prodotto Indice: CD127 FITC Storage Conditions: Conservare a 2-8 °C. Non congelare. Catalog Number(s): 9011-1278-025 (25 tests), Materiale fotosensibile. 9011-1278-120 (120 tests) Attenzione: contiene azide Clone: RDR5 Manufacturer: eBioscience, Inc., 10255 Science Center Concentration: 5 µl (0,125 µg)/test (un test viene definito Drive, San Diego, CA 92121, USA come la quantità in grado di colorare 1x10e6 cellule in 100 μl) Authorized Representative: Bender MedSystems GmbH, Ospite/isotipo: IgG1 di topo, kappa an eBioscience Company Campus Vienna Biocenter 2 Formulazione: Tampone acquoso, 0,09% di sodio azide; A-1030 Vienna Austria può contenere proteina carrier/stabilizzante. Uso previsto L'anticorpo monoclonale RDR5 coniugato con fluorocromo reagisce il recettore IL-7 multi-funzionale (IL-7R). Il CD127 è una con l'antigene CD127 umano. Il CD127 può essere rilevato in espresso dai linfociti B immaturi attraverso la fase iniziale pre-B, dai campioni biologici umani mediante tecniche immunologiche. timociti durante diverse fasi del loro sviluppo e sulla maggior parte Principi del test La citometria a flusso è uno strumento utile per la misurazione simultanea delle diverse proprietà fisiche di singole particelle (come ad es., le cellule). Le cellule attraversano un raggio laser allineate una dietro l'altra. Per ogni cellula che attraversa il raggio laser il citometro registra il modo in cui la cellula o la particella disperdono la luce laser incidente ed emettono fluorescenza. Mediante questo protocollo di analisi con citometria a flusso è possibile eseguire l'analisi simultanea delle molecole di superficie a livello della singola cellula. glicoproteina di tipo I con un peso molecolare di 75-80 kDa ed è dei linfociti T maturi, con sotto-regolazione transitoria all'attivazione. Il legame dell'IL-7 determina una transduzione di segnale che si verifica attraverso diversi percorsi tirosin-chinasi, compreso il percorso Jak/STAT. L'IL-7 è indispensabile per lo sviluppo dei linfociti e il controllo della proliferazione omeostatica dei linfociti T periferici. Inoltre, è noto che la segnalazione IL-7R è coinvolta nella regolazione della ridistribuzione del locus del recettore dei linfociti T (TCR) nei linfociti T gamma/delta. È stato dimostrato che l'espressione di CD127 è sotto-regolata sui linfociti T regolatori CD4+CD25+ (T reg). Sebbene la co-espressione di CD4 e Descrizione L'anticorpo monoclonale RDR5 reagisce con l'antigene CD127 CD25 è diventata ampiamente utilizzata come indicatore dei T reg, umano (alfa recettore interleuchina-7). Il CD127 si unisce a CD132, attività soppressiva. È stato chiaramente mostrato che le cellule noto anche come la catena gamma comune (gamma c), per formare CD4+CD25+ che hanno sotto-regolato l'espressione di CD127 sono questo metodo di identificazione può anche includere cellule senza Document # 30895_01_it • Effective date: 4/27/2012 Not for further distribution without written consent. Copyright © 2000-2010 eBioscience, Inc. www.eBioscience.com ORDER INQUIRIES • +43 1 796 40 40-120 TECH • +43 1 796 40 40-0 [email protected] Page 2 of 2 significativamente più altamente arricchite per la popolazione T 6. regolatoria, come definito dall'espressione del fattore di Centrifugare i campioni a 300-400 x g per 5 minuti a temperatura ambiente, decantare/aspirare il surnatante trascrizione specifico T reg Foxp3 e l'attività di soppressione di e lavare 1 volta con 2 ml di Flow Cytometry Staining Buffer. queste cellule in vitro. 7. Centrifugare i campioni a 300-400 x g per 5 minuti a Istruzioni per il prelievo e la conservazione dei campioni Prelevare un campione di sangue venoso mediante venipuntura in 8. Risospendere il pellet di cellule colorate in 1 ml di Flow temperatura ambiente, decantare/aspirare il surnatante. una provetta sterile per la raccolta del sangue, utilizzando un Cytometry Staining Buffer e analizzare i campioni con un anticoagulante appropriato (si consiglia di utilizzare EDTA). citometro a flusso. Conservare i campioni a temperatura ambiente (18-25 °C). Prima dell'uso, miscelare i campioni agitandoli delicatamente. Limiti 1. Per una performance ottimale degli anticorpi coniugati con il Materiali necessari ma non forniti • Provette da 12 x 75 mm 2. • fluorocromo, conservare le fiale al buio a 2-8 °C. Non congelarle. • 3. • devono essere eseguite su ghiaccio oppure a 2-8 °C con una N. cat. 00-4333 o eBioscience 1-step Fix/Lyse Solution (10X), minima esposizione alla luce. Per la colorazione intracellulare utilizzare IC Fixation Buffer e Caratteristiche della performance La costanza della performance dei reagenti di alta qualità viene Permeabilization Buffer, N. cat. 88-8823 (colorazione per le assicurata mediante l'analisi di ciascun lotto di anticorpi citochine intracellulari o per le proteine citoplasmatiche) monoclonali per eseguire il confronto tra la loro conformità e le o Foxp3 Buffer Set, N. cat. 00-5523 (colorazione delle proteine caratteristiche di un reagente standard. Quando ritenuto idoneo, nucleari). Fare riferimento alla sezione Best Protocols del sito vengono inclusi i dati rappresentativi della citometria a flusso. web di eBioscience per i protocolli "Staining Intracellular Antigens for Flow Cytometry". Segni di deterioramento Per qualsiasi domanda o dubbio riguardanti la performance o la Colorazione di vitalità (si consiglia 7-AAD Viability Staining qualità dei prodotti ricevuti, contattare l'assistenza tecnica di Solution, N. cat. 00-6993 o Propidium Iodide Staining Solution, eBioscience (vedere di seguito). N. cat. 00-6990) • Tranne quando riportato nel protocollo, tutte le colorazioni Tampone di lisi (si consiglia eBioscience 1X RBC Lysis Buffer, N. cat. 00-5333) • massimo volume possibile. Tamponi (si consiglia eBioscience Flow Cytometry Staining Buffer, N. cat. 00-4222) Centrifugare la fiala con gli anticorpi per recuperare il Bibliografia Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Pipette automatiche • Centrifuga • Miscelatore Vortex • Secchio con ghiaccio o frigorifero • Citometro a flusso Venipuncture (H3-A6), 3rd Edition published by the National Committee for Clinical Laboratory Standards.Liu W, Putnam AL, Xu-Yu Z, Szot GL, Lee MR, Zhu S, Gottlieb PA, Kapranov P, Gingeras TR, de St Groth BF, Clayberger C, Soper DM, Ziegler SF, Bluestone JA. Protocollo del test CD127 expression inversely correlates with FoxP3 and suppressive NOTA: per la colorazione intracellulare, fare riferimento alla sezione Best Protocols del sito web di eBioscience per i protocolli "Staining Intracellular Antigens for Flow Cytometry". 1. Erogare 100 µl del campione di analisi nelle provette. function of human CD4+ T reg cells. J Exp Med. 2006 Jul 2. Aggiungere 5 µl dell'anticorpo appropriato in ciascuna provetta. Fazekas de St Groth B. Expression of interleukin (IL)-2 and IL-7 3. Incubare per 30-60 minuti a 2-8 °C. In alternativa, i campioni receptors discriminates between human regulatory and activated T possono essere incubati al buio a temperatura ambiente per cells. J Exp Med. 2006 Jul 10;203(7):1693-700. 15-30 minuti. Goodwin RG, Friend D, Ziegler SF, Jerzy R, Falk BA, Gimpel S, Aggiungere 2 ml di 1X RBC Lysis Buffer (a temperatura Cosman D, Dower SK, March CJ, Namen AE, et al. Cloning of the ambiente) ad ogni provetta. Miscelare delicatamente. (In human and murine interleukin-7 receptors: demonstration of a alternativa, è possibile incubare i campioni con 2 ml di 1-step soluble form and homology to a new receptor superfamily. Cell. Fix/Lyse Solution). 1990 Mar 23;60(6):941-51 4. 5. 10;203(7):1701-11. Seddiki N, Santner-Nanan B, Martinson J, Zaunders J, Sasson S, Landay A, Solomon M, Selby W, Alexander SI, Nanan R, Kelleher A, Incubare i campioni al buio e a temperatura ambiente per 10 minuti. Con l'RBC Lysis Buffer non superare 15 minuti di incubazione. Document # 30895_01_it • Effective date: 4/27/2012 Not for further distribution without written consent. Copyright © 2000-2010 eBioscience, Inc. www.eBioscience.com ORDER INQUIRIES • +43 1 796 40 40-120 TECH • +43 1 796 40 40-0 [email protected]