CD127 FITC - Thermo Fisher Scientific

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CD127 FITC
Noto anche come: Interleukin-7 Receptor alpha, IL-7Ra
Catalog Number(s): 9011-1278-025 (25 tests), 9011-1278-120 (120 tests)
Profili di fluorescenza di normali linfociti del sangue periferico umano
non colorati (istogramma blu) o colorati con CD127 coniugati con FITC
(istogramma viola).
Informazioni sul prodotto
Indice: CD127 FITC
Storage Conditions: Conservare a 2-8 °C. Non congelare.
Catalog Number(s): 9011-1278-025 (25 tests),
Materiale fotosensibile.
9011-1278-120 (120 tests)
Attenzione: contiene azide
Clone: RDR5
Manufacturer: eBioscience, Inc., 10255 Science Center
Concentration: 5 µl (0,125 µg)/test (un test viene definito
Drive, San Diego, CA 92121, USA
come la quantità in grado di colorare 1x10e6 cellule in 100 μl)
Authorized Representative: Bender MedSystems GmbH,
Ospite/isotipo: IgG1 di topo, kappa
an eBioscience Company Campus Vienna Biocenter 2
Formulazione: Tampone acquoso, 0,09% di sodio azide;
A-1030 Vienna Austria
può contenere proteina carrier/stabilizzante.
Uso previsto
L'anticorpo monoclonale RDR5 coniugato con fluorocromo reagisce
il recettore IL-7 multi-funzionale (IL-7R). Il CD127 è una
con l'antigene CD127 umano. Il CD127 può essere rilevato in
espresso dai linfociti B immaturi attraverso la fase iniziale pre-B, dai
campioni biologici umani mediante tecniche immunologiche.
timociti durante diverse fasi del loro sviluppo e sulla maggior parte
Principi del test
La citometria a flusso è uno strumento utile per la misurazione
simultanea delle diverse proprietà fisiche di singole particelle (come
ad es., le cellule). Le cellule attraversano un raggio laser allineate una
dietro l'altra. Per ogni cellula che attraversa il raggio laser il citometro
registra il modo in cui la cellula o la particella disperdono la luce laser
incidente ed emettono fluorescenza. Mediante questo protocollo di
analisi con citometria a flusso è possibile eseguire l'analisi simultanea
delle molecole di superficie a livello della singola cellula.
glicoproteina di tipo I con un peso molecolare di 75-80 kDa ed è
dei linfociti T maturi, con sotto-regolazione transitoria
all'attivazione. Il legame dell'IL-7 determina una transduzione di
segnale che si verifica attraverso diversi percorsi tirosin-chinasi,
compreso il percorso Jak/STAT. L'IL-7 è indispensabile per lo
sviluppo dei linfociti e il controllo della proliferazione omeostatica
dei linfociti T periferici. Inoltre, è noto che la segnalazione IL-7R è
coinvolta nella regolazione della ridistribuzione del locus del
recettore dei linfociti T (TCR) nei linfociti T gamma/delta. È stato
dimostrato che l'espressione di CD127 è sotto-regolata sui linfociti T
regolatori CD4+CD25+ (T reg). Sebbene la co-espressione di CD4 e
Descrizione
L'anticorpo monoclonale RDR5 reagisce con l'antigene CD127
CD25 è diventata ampiamente utilizzata come indicatore dei T reg,
umano (alfa recettore interleuchina-7). Il CD127 si unisce a CD132,
attività soppressiva. È stato chiaramente mostrato che le cellule
noto anche come la catena gamma comune (gamma c), per formare
CD4+CD25+ che hanno sotto-regolato l'espressione di CD127 sono
questo metodo di identificazione può anche includere cellule senza
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significativamente più altamente arricchite per la popolazione T
6.
regolatoria, come definito dall'espressione del fattore di
Centrifugare i campioni a 300-400 x g per 5 minuti a
temperatura ambiente, decantare/aspirare il surnatante
trascrizione specifico T reg Foxp3 e l'attività di soppressione di
e lavare 1 volta con 2 ml di Flow Cytometry Staining Buffer.
queste cellule in vitro.
7.
Centrifugare i campioni a 300-400 x g per 5 minuti a
Istruzioni per il prelievo e la conservazione dei campioni
Prelevare un campione di sangue venoso mediante venipuntura in
8.
Risospendere il pellet di cellule colorate in 1 ml di Flow
temperatura ambiente, decantare/aspirare il surnatante.
una provetta sterile per la raccolta del sangue, utilizzando un
Cytometry Staining Buffer e analizzare i campioni con un
anticoagulante appropriato (si consiglia di utilizzare EDTA).
citometro a flusso.
Conservare i campioni a temperatura ambiente (18-25 °C). Prima
dell'uso, miscelare i campioni agitandoli delicatamente.
Limiti
1.
Per una performance ottimale degli anticorpi coniugati con il
Materiali necessari ma non forniti
•
Provette da 12 x 75 mm
2.
•
fluorocromo, conservare le fiale al buio a 2-8 °C. Non congelarle.
•
3.
•
devono essere eseguite su ghiaccio oppure a 2-8 °C con una
N. cat. 00-4333 o eBioscience 1-step Fix/Lyse Solution (10X),
minima esposizione alla luce.
Per la colorazione intracellulare utilizzare IC Fixation Buffer e
Caratteristiche della performance
La costanza della performance dei reagenti di alta qualità viene
Permeabilization Buffer, N. cat. 88-8823 (colorazione per le
assicurata mediante l'analisi di ciascun lotto di anticorpi
citochine intracellulari o per le proteine citoplasmatiche)
monoclonali per eseguire il confronto tra la loro conformità e le
o Foxp3 Buffer Set, N. cat. 00-5523 (colorazione delle proteine
caratteristiche di un reagente standard. Quando ritenuto idoneo,
nucleari). Fare riferimento alla sezione Best Protocols del sito
vengono inclusi i dati rappresentativi della citometria a flusso.
web di eBioscience per i protocolli "Staining Intracellular
Antigens for Flow Cytometry".
Segni di deterioramento
Per qualsiasi domanda o dubbio riguardanti la performance o la
Colorazione di vitalità (si consiglia 7-AAD Viability Staining
qualità dei prodotti ricevuti, contattare l'assistenza tecnica di
Solution, N. cat. 00-6993 o Propidium Iodide Staining Solution,
eBioscience (vedere di seguito).
N. cat. 00-6990)
•
Tranne quando riportato nel protocollo, tutte le colorazioni
Tampone di lisi (si consiglia eBioscience 1X RBC Lysis Buffer,
N. cat. 00-5333)
•
massimo volume possibile.
Tamponi (si consiglia eBioscience Flow Cytometry Staining
Buffer, N. cat. 00-4222)
Centrifugare la fiala con gli anticorpi per recuperare il
Bibliografia
Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by
Pipette automatiche
•
Centrifuga
•
Miscelatore Vortex
•
Secchio con ghiaccio o frigorifero
•
Citometro a flusso
Venipuncture (H3-A6), 3rd Edition published by the National
Committee for Clinical Laboratory Standards.Liu W, Putnam AL,
Xu-Yu Z, Szot GL, Lee MR, Zhu S, Gottlieb PA, Kapranov P, Gingeras
TR, de St Groth BF, Clayberger C, Soper DM, Ziegler SF, Bluestone JA.
Protocollo del test
CD127 expression inversely correlates with FoxP3 and suppressive
NOTA: per la colorazione intracellulare, fare riferimento alla sezione
Best Protocols del sito web di eBioscience per i protocolli "Staining
Intracellular Antigens for Flow Cytometry".
1. Erogare 100 µl del campione di analisi nelle provette.
function of human CD4+ T reg cells. J Exp Med. 2006 Jul
2.
Aggiungere 5 µl dell'anticorpo appropriato in ciascuna provetta.
Fazekas de St Groth B. Expression of interleukin (IL)-2 and IL-7
3.
Incubare per 30-60 minuti a 2-8 °C. In alternativa, i campioni
receptors discriminates between human regulatory and activated T
possono essere incubati al buio a temperatura ambiente per
cells. J Exp Med. 2006 Jul 10;203(7):1693-700.
15-30 minuti.
Goodwin RG, Friend D, Ziegler SF, Jerzy R, Falk BA, Gimpel S,
Aggiungere 2 ml di 1X RBC Lysis Buffer (a temperatura
Cosman D, Dower SK, March CJ, Namen AE, et al. Cloning of the
ambiente) ad ogni provetta. Miscelare delicatamente. (In
human and murine interleukin-7 receptors: demonstration of a
alternativa, è possibile incubare i campioni con 2 ml di 1-step
soluble form and homology to a new receptor superfamily. Cell.
Fix/Lyse Solution).
1990 Mar 23;60(6):941-51
4.
5.
10;203(7):1701-11.
Seddiki N, Santner-Nanan B, Martinson J, Zaunders J, Sasson S,
Landay A, Solomon M, Selby W, Alexander SI, Nanan R, Kelleher A,
Incubare i campioni al buio e a temperatura ambiente per
10 minuti. Con l'RBC Lysis Buffer non superare 15 minuti di
incubazione.
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