Pag.1of5 HANDS-ONGUIDE PERISCANPIMIILDPI TITOLO: PERISCANPIMIILDPI SCOPO: Istruiregliutentidellafacilitydiimagingpreclinicoal correttousodelloscannerLDPIepost-processingdelle immagini PreclinicalImagingFacility,CEINGEscarl,Naples,Italy 2009 Dr.SaraGargiulo,Dr.MatteoGramanzini DESTINATARI: ULTIMAREVISIONE: AUTORI: NOTA:lapresenteguidaoperativanonsostituiscelaaccurataletturaeconsultazionedeimanualidelle apparecchiaturefornitidalladittaproduttrice ANESTESIA AnestesiagassosaconmisceladiIsofluranoeOssigenooiniettabile PeriscanPIMIISystem v Introduzione Il Periscan laser doppler usa un fascio laser allo stato solido a basso potere 670nm, che esegue una scansione sequenzialeegradualedellasuperficietissutale.Perevitareartefattidimovimento,ilfasciolasersifermapercirca 35 millisecondi prima di ogni misurazione. Questo significa che il fascio non è in movimento relativo al tessuto quandoilsegnalevienecampionato.Leradiazioniriflessesonocaptatedallecomponentideldopplerdopoessere state generate dal movimento delle cellule ematiche della rete superficiale microvascolare, in 4096 punti della superficie in studio. In ogni punto del tessuto, il fascio laser monocromatico penetra per una profondità di poche centinaia di micrometri. In seguito all’interazione con particelle in movimento, generalmente globuli rossi, una frazionedeifotonivienedeviatoinfrequenzasecondoilprincipiodoppler,mentrealtrifotoni,interagendosoltanto con la parte statica del tessuto, non vengono modificati in frequenza. Una piccola porzione di luce riflessa, comprendenteunmistodilucenonmodificataelucemodificatainfrequenza,colpisceilfotodetettoreposizionato nello scanner. L’insieme dei fasci di luce sulla superficie del fotodetettore permette di modulare l’immagine in misuradeterminatadallacomponentedilucedeviatainfrequenza.Laampiavariazionedifrequenzageneratadalle celluleematichechesimuovonoadaltavelocitàgeneralmentedeterminapiùaltefrequenzenell’immagine,mentre lagrandezzadellaporzionefluttuantedell’immagineècorrelataalnumerodicelluleematichechesimuovononel campionevolume. Pag.2of5 Inognipuntodeltessuto,ilfasciolasersiarrestapercirca50millisecondiperregistrareleradiazioniriflesse.Appena ilfasciolasersispostadaunpuntodeltessutoalsuccessivo,vienevisualizzatalacompletaimmaginediperfusione. In aggiunta, una foto in bianco e nero del tessuto basata sulla registrazione totale della luce riflessa viene rappresentatacomeimmagineseparata. vAreadiscansione Ogniareadiscansionecomprendealmassimo64X64puntidicampionamento. Laattualedimensionedell’areacampionataeladistanzatra2punticonsecutividicampionamento(“stepleght”) dipendedalladistanzatrascanneretessutoedallamodalitàdirisoluzionescelta. Nb:laluceambientalepuòinfluenzareivaloridiperfusione! vApplicazionidelPerimedlaserdopplersystem IlPerimedLaserDopplerèunanuovatecnologiaperstudisulmicrocircoloincampoclinicoenellaricercadi laboratorio.Latecnicapuòessereusatapermonitorarel’attivitàmicrocircolatorianeitessutisaniemalati.Essapuò essereutileancheacomprenderelerispostedelmicrocircoloinseguitoall’applicazionediunostimolo.IlPeriscan Systemèunsistemadiimagingalaserdopplerperfusionperl’esamedellaperfusionesuperficialedeitessutinon invasiva.Basatosulprincipiodellaserdoppler,essoraccoglieiraggiluminosiriflessisenzatoccareiltessutoegenera immaginiacoloridelladistribuzionespazialedellaperfusionedeitessuti. Levariazionineltempodellaperfusioneematicatissutaleinunsingolositooinpiùsitipuòessereregistrata eseguendol’esameinmodalità“DUPLEX”. LamodalitàoperativacitatarendeilPeriscanSystemadattoall’esamedellevariazionidinamicheedella eterogeneitàdellamicrocircolazione.IlsoftwarePeriscanoffreunsupportonellavalutazionedeirisultati,che possonoancheessereesportatisualtrisoftwareperulteriorianalisi.Dalmomentochenonc’ècontattofisicocol tessutobersaglio,l’influenzasullaperfusioneematicapuòessereconsideratanonrilevante.Questosignificache ripetutiesamiclinicinelcorsodeltempodiunaparticolarecondizionepossonoessereeseguitisenzarischidi contaminazione,infezioneodisturboperilpaziente. vComponentidelPeriscansystem 1)software:controllailsistemadiacquisizionedelleimmaginievalutai risultati. 2)Sistemadiacquisizioneimmagini:scanner,opto-isolationunitescheda diacquisizionedati vAcquisizioneimmagini 1)accenderepcemonitor 2)accenderel’opto-isolationunit 3)accendereilpulsanteon-offdelloscanner 4)farriscaldareloscannerperalmeno20minutiprimadicominciarele misurazioni. 5)AprireilprogrammaPERISCANSISTEMSOFTWARELDPIwin 6)Modularel’intensitàdellaluceriflessa: a)posizionareloscanneracirca20cmdall’oggetto Pag.3of5 b)selezionareTOOLS=>INTENSITYeaumentareilvalorediintensitàtra7e9voltsavvicinandoloscanner all’oggetto.Lasogliapredefinitavaimpostataa6,2volts,poicliccareOK 7)impostarelafunzione“MARKAREA” Questafunzionevaimpostataprimadellemisurazioniepermettedidefinirel’areaoggettodimisurazioniequanto essasiaampia. a)cliccaresull’icona“markarea”edillasersimuoveràlungoilperimetrodell’immaginepermostrarel’area campionata.E’possibilecontrassegnareibordispecificidellazonacliccandoipulsantinumeratinellafinestradi dialogo.Ibordipossonoesseremarcati1voltaselezionandoF1ocontinuamente,selezionandoF2 b)Adattareledimensionidelleimmaginiaumentandooriducendoladistanzatraloscannerel’oggetto. NB:ricordarechealvariaredelladistanzascanner-oggettovarial’intensità c)impostarelafunzione“HEADPOSITION”orientandolascannerimagenelladirezionerealedelloscanner. d)NB:lafunzione“MARKEDGES”deveessereinterrotta! vImmagineasingolaperfusione 1)tools=>intensity 2)iconaMD(measurementdialog)=>Singlemode 3)icona“markerarea”:illasermostrailperimetrodell’immagine=>ok 4)aprireunanuovaimmaginewindowselezionandoFILE=>NEWo sull’appositaicona 5)avviarelaregistrazioneconSTAR:Tilfasciolaserscannerizzal’immaginepassoapasso. 6)Aggiungereuncommentodasalvareconl’immaginecoltasto“Comments” 7)Salvarel’immagineselezionandoFILE=>SAVEASocliccandosull’iconaconl’immaginedelfloppyescegliereil nomeperilfileimmagine. vImmagineaperfusioneripetuta 1)tools=>intensity 2)cliccaresuMD,selezionare“repeatmode”,impostareilsettaggiopredefinito: WIDTH 32 HEIGHT 32 N°IMAGE 12 AUTO PAUSE TIMEDELAY 5SEC THRESHOLD 6,2 Pag.4of5 econfermareconOK 3)selezionareTools=>Options,impostareilsettaggiopredefinito: COLORSCALE USERDEFINED MIN 0VOLT MAX 5VOLT echiuderelafinestradidialogo. 4)aprireunanuovafinestra-immaginewindowsselezionandoFile=>Newoutilizzandolacorrispondenteicona. 5)AvviarelaregistrazionecliccandoSTARTedillaserscansisceprogressivamentel’oggetto. Quandolaprima“subimmagine"èstataregistrata,appareunafinestradi“statomisurazione”.Attendereiltempo restanteperl’acquisizione.Quandosonostateregistratetutteleimmagini,unacasellamostreràiln°diimmagini acquisite.Utilizzaretalecasellapervisualizzarle. 6)Salvarel’immagineconFile=>SaveAsoappositaicona v Immaginediperfusionein“sequentialmode” 1)tools=>intensity 2)cliccaresuMD,selezionare“sequentialmode”,impostareilsettaggiopredefinito: IMAGESETUP 4image32X32 STARTMETHOD AUTOPAUSE RESOLUTION HIGHT TIMEDELAY 5SEC THRESHOLD 6,2 econfermareconOK 3)aprireunanuovafinestra-immaginewindowsselezionandoFile=>Newoutilizzandolacorrispondenteicona. 4)Avviarelaregistrazionecliccando Quandotutteleimmaginisonostateregistrate,unafinestramostrailnumerodiimmaginiacquisite.Essapermette discorrereleimmagini. 5)Salvarel’immagineconFile=>SaveAsoappositaicona NOTA:nonsipuòutilizzarelamodalitàROIcalculationinsequentialmode vRegistrazionein“DuplexMode” Questasezionemostracomeregistrarelaperfusioneinmodocontinuoperunsingolositoounnumerodisiti adiacentisullasuperficiedeitessutiepresentareirisultatiinfunzionedeltempo. 1) tools=>intensity Pag.5of5 2) cliccaresuMD,selezionare“sequentialmode”,impostareilsettaggiopredefinito: PROBECONFIGURATION 3X3MEASUREMENTSITE RESOLUTION HIGHT THRESHOLD 6,2 econfermareconOK 3)aprireunanuovafinestra-immaginewindowsselezionandoFile=>Newoutilizzandolacorrispondenteicona. 4)avviarelaregistrazioneconSTART=>RECORD;illaserscansisceisitidimisurazione(9siti=3X3) Ilvaloremedioinperfusionevienecontinuamenterappresentatoinfunzionedeltempo.IlcomandoSTOPpermette diinterromperelaregistrazione.5)Salvarel’immagineconFile=>SaveAsoappositaicona vElaborazionedelleimmagini Un’immaginepuòesseremodificatadopolaregistrazione. ØScegliere“Userdefinedperfusioncolorscale”esttaremin0max8Volt.Osservarequanticolriinpiùappaiono nell’immaginediperfusioneriducendoilvaloremax. ØDeselezionare“Interpolate”eosservarequantolerealiimmaginisonosimili ØSelezionare“Superimpose2persovrapporrele2immagini(fotoeperfusion). ØSelezionare“ViewFoto”pervisualizzarelafotodell’oggetto. vAnalisideidati UsandolostrumentoROIèpossibileconfrontarediferentiregionidell’areamisurata.Valorichepossonoessere analizzatisonomin,max,deviazionestandard,media,cambiamentoassoluto,cambiamentopercentualeenumero disitinell’area.Siprocedenelmodoseguente: 1)aprirel’immaginesalvata(ciccaresull’iimagine.Poisucartella,openctrl+oeapri 2)scegliereunmarker 3)marcarelaROIconl’ausiliodelmouse 4)utilizzarel’appositocomando–frecciapereliminare,spostare,ridimensionarelaROI 5)quandol’areaèmarcataappariràlafinestradeicalcolisullaROI Ivaloristatisticisonocalcolaticonunadelleareecomereferenza.L’areadireferenzapuòesserecambiatain corrispondenzadi“referenteROI“(1di4;2di4;etc). Idatipossonoessereesportatisuunfoglioexcelloword(“exportoptions”)nellafinestraROI.Un’immaginediper fusionepuòesserecopiatasuword: -aprirel’immagine -edit=>copyimage=>l’immaginevienecopiatain“clipboard” -edit=>paste REFERENZE 1- PERISCANPIMIIPERIMEDMANUAL