DRI® Thyroxine (T4) Assay - Thermo Fisher Scientific

DRI® Thyroxine (T4) Assay
Per uso diagnostico in vitro
0454 (kit da 100 ml)
10013070 (kit da 500 ml)
Uso previsto
La tiroxina è sensibile alla luce. Conservare tutti i reagenti contenenti tiroxina (coniugato
enzimatico, calibratori, controlli o campioni dei pazienti) in modo tale da ridurre al minimo
l'esposizione diretta alla luce solare.
Riepilogo e spiegazione del test
Se la confezione arriva danneggiata, contattare il rappresentante locale dell'assistenza tecnica.
Questo saggio immunoenzimatico in fase omogenea per la tiroxina è destinato all'uso per la
determinazione quantitativa della tiroxina totale nel siero o plasma umano.
La tiroxina (T4) viene sintetizzata nei follicoli della ghiandola tiroidea e rilasciata nel circolo
sanguigno tramite un complesso sistema a feedback1. La ghiandola tiroidea viene regolata
dall'ormone stimolante la tiroide (TSH, Thyroid Stimulating Hormone), prodotto e secreto
dall'ipofisi. La produzione e la secrezione del TSH avvengono per stimolazione da parte
dell’ormone TRH (Thyroid Releasing Hormone), rilasciato dall'ipotalamo.
Preparazione e conservazione dei reagenti
I reagenti sono pronti per l'uso. Non è richiesta la preparazione di alcun reagente. Tutti i
componenti del saggio, se conservati in condizioni appropriate a una temperatura compresa
tra 2 e 8 °C sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta.
La maggior parte della tiroxina nel circolo sanguigno è legata principalmente alla globulina legante
la tiroxina (TBG, Thyroxine Binding Globulin) e in parte minore all'albumina e alla prealbumina
leganti la tiroxina 2,3. Solo meno dell'1% della tiroxina si trova in forma non legata come T4 libera
nel sangue. Livelli di tiroxina totale elevati sono stati associati all'ipertiroidismo, una condizione
caratterizzata da una quantità eccessiva di ormone tiroideo circolante, mentre livelli di tiroxina
totale ridotti sono stati associati a ipotiroidismo, condizione caratterizzata da concentrazioni di
tiroxina insufficienti. Un malfunzionamento primario della ghiandola tiroidea o qualsiasi malattia a
carico del sistema tiroide-ipofisi-ipotalamo può causare una concentrazione anomala di tiroxina
nel sangue. La misurazione della concentrazione di tiroxina totale (frazione libera + frazione
legata a proteine) rappresenta uno dei metodi più ampiamente utilizzati per la valutazione della
stato della tiroide di un soggetto4.
Prelievo e gestione dei campioni
DRI® Thyroxine Assay è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea che utilizza reagenti
liquidi pronti per l'uso. Nel saggio viene utilizzato acido 8-anilino-1-naftalensolfonico (ANS) per
dissociare la tiroxina dalle proteine a cui è legata nel plasma. Alla tiroxina dissociata nel campione
viene consentito di competere con tiroxina marcata con l'enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi
(G6PDH) per una determinata quantità di siti di legame di un anticorpo specifico anti-tiroxina
presente nella soluzione. In assenza di tiroxina nel campione, la tiroxina marcata con G6PDH viene
legata dall'anticorpo specifico e l'attività dell'enzima viene inibita. Questo fenomeno crea una
correlazione diretta tra la concentrazione di tiroxina nel campione e l'attività dell'enzima. L'attività
dell'enzima G6PDH è determinata tramite spettrofotometria a 340 nm mediante misurazione della
sua capacità di convertire il NAD (nicotinammide adenina dinucleotide) in NADH.
Per eseguire questo saggio immunoenzimatico in fase omogenea è possibile utilizzare
analizzatori di chimica clinica in grado di mantenere una temperatura costante, pipettare i
campioni, miscelare i reagenti, misurare la velocità di reazione enzimatica a 340 nm e il tempo
di reazione in modo accurato.
Materiali forniti
Reagente anticorpo/substrato Contiene anticorpo monoclonale anti-tiroxina, acido 8-anilinonaftalensolfonico (ANS), glucosio-6-fosfato (G6P) e nicotinammide adenina dinucleotide (NAD)
in tampone Tris con sodio azide come conservante.
Reagente coniugato enzimatico Contiene tiroxina marcata con glucosio-6-fosfato deidrogenasi
(G6PDH) in tampone Tris con sodio azide come conservante.
Calibratori (venduti separatamente)
Thyroxine Calibrator Kit (n. cat. 0476): Contiene 2 ml di ciascuno dei calibratori: negativo, 2 µg/dl,
4 µg/dl, 8 µg/dl, 12 µg/dl e 20 µg/dl di tiroxina in siero umano con sodio azide come conservante.
Precauzioni e avvertenze
Questo test è solo per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono pericolosi se ingeriti.
PERICOLO: DRI Thyroxine (T4) Assay contiene ≤0,1% di albumina sierica bovina (BSA).
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.
H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere
portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. In caso di
ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle:
lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è
difficile, trasportare l'infortunato all'aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca
la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso
di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti
contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il prodotto/recipiente nelle apposite aree
in conformità alla regolamentazione locale/regionale/nazionale/internazionale.
I reagenti utilizzati nei componenti del saggio contengono ≤0,09% di sodio azide. Evitare il
contatto con la cute e le membrane mucose. In caso di contatto, lavare la zona interessata con
abbondante acqua. In caso di contatto con gli occhi o di ingestione consultare immediatamente
il medico. La sodio azide può reagire con tubazioni in piombo o rame formando azidi metalliche
potenzialmente esplosive. Prima di smaltire tali reagenti, sciacquare sempre con grandi
quantità di acqua per evitare la formazione di azidi. Pulire le superfici metalliche esposte con
idrossido di sodio al 10%.
Non utilizzare i reagenti dopo le rispettive date di scadenza.
Il saggio è adatto all'uso su plasma o siero. È stato riscontrato che gli anticoagulanti, come
eparina, citrati, ossalati ed EDTA, non influiscono sul saggio. È preferibile eseguire l'analisi su
campioni di siero freschi. Se non è possibile analizzare il campione immediatamente, è possibile
conservarlo refrigerato per un massimo di una settimana o congelato per un massimo di un
mese. Evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento dei campioni. Cercare di ottenere
campioni senza detriti di grandi dimensioni. Si consiglia di centrifugare i campioni altamente
torbidi prima dell'analisi.
Maneggiare tutti i campioni di siero o plasma come materiale potenzialmente infettivo.5
Strumenti
Procedura del saggio
Gli analizzatori chimici con le specifiche indicate sono adatti per l'esecuzione di questo saggio
immunoenzimatico in fase omogenea. Prima di eseguire l'analisi, fare riferimento alle istruzioni
applicative specifiche per ciascun saggio e ai parametri specifici per ciascun analizzatore.
Controllo di qualità e calibrazione
La buona pratica di laboratorio suggerisce l'uso di campioni di controllo per convalidare la
calibrazione e verificare le corrette prestazioni del saggio. Per tale scopo, sono disponibili diversi
controlli commerciali multilivello. Verificare che i risultati dei controlli rientrino nell'intervallo
definito. Se si utilizzano nuovi reagenti o se i valori dei controlli sono al di fuori dell'intervallo
definito, calibrare nuovamente il sistema. Tutti i requisiti di controllo di qualità devono essere
soddisfatti in conformità alle normative vigenti o ai requisiti per l'accreditamento.
Risultati e interpretazione dei dati
I risultati relativi alla concentrazione di tiroxina nei campioni vengono calcolati automaticamente
dall'analizzatore di chimica clinica. Non è richiesta alcuna manipolazione aggiuntiva dei dati.
I campioni per i quali viene rilevata una quantità superiore a 20 μg/dl possono essere riportati
come >20 μg/dl oppure diluiti utilizzando il calibratore negativo. Il valore relativo ai campioni
diluiti si ottiene moltiplicando il risultato per il fattore di diluizione.
Diversi fattori possono influenzare il rapporto tra la concentrazione di tiroxina nel siero o nel
plasma e la risposta clinica. Tali fattori includono età, sesso e stato di salute del paziente,
trattamento con terapie farmacologiche specifiche, patologie non tiroidee, gravidanza, uso
di estrogeni o contraccettivi e concentrazioni di globulina legante la tiroxina (TBG, Thyroxine
Binding Globulin) geneticamente elevate o ridotte. In presenza delle condizioni sopra citate,
l'analisi della tiroxina totale deve essere utilizzata esclusivamente come procedura di screening
preliminare.1 Una diagnosi accurata dello stato della tiroide deve essere integrata con altri test
diagnostici per la valutazione dell'indice di T4 libera (FTI), del TSH, di T3, del TRH, ecc., nonché
con la valutazione clinica del medico.
Valori attesi
L'intervallo di concentrazioni di T4 di individui ritenuti sani è stato definito tra 4,5 e 12 μg/
dl. Poiché gli intervalli "normali" possono essere influenzati da età, genere, dieta, posizione
geografica e altri fattori, ogni laboratorio è tenuto a definire i propri valori attesi per questa
procedura.
Limitazioni
La sensibilità, definita come la più bassa concentrazione distinguibile dal siero negativo con
una confidenza del 95%, è di 0,7 μg/dl. Questo saggio è ottimizzato per la determinazione della
tiroxina esclusivamente nel siero o nel plasma e non è stato ottimizzato per la determinazione
della tiroxina nel sangue intero. In rari casi, i pazienti possono presentare autoanticorpi che
interferiscono con il saggio e producono valori dei risultati di test bassi.
Bibliografia
Caratteristiche di prestazione tipiche
1. Ingbar SH, Woeber KA. The Thyroid Gland. In: Text Book of Endocrinology. Williams RH.
ed. Philadelphia, PA; WB Saunders Company, 95 (1974).
2. Robbins J. “Thyroxine-Binding Protein in Serum” In: Laborator Diagnosis of Endocrine
Disease. Saunderman and Saunderman eds., St. Louis, MO; Warren H. Green, Inc., 221
(1971).
3. Larsen PR, et al. "Immunoassay of Thyroxine in Unextracted Human Serum", J. Clin.
Endocrinol. Metal., 37, 177 (1973).
4. Penney M, O’Sullivan J. Total or Free Thyroxine as a Primary Test of Thyroid Function.
Clin. Chem., 33, 170 (1987).
5.Centers for Disease Control/National Institutes of Health manual "Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories". 1988.
I dati delle prestazioni tipiche indicati di seguito sono stati ottenuti su un analizzatore di chimica
clinica Hitachi 717:
Precisione
La precisione intra-ciclo e dell'analisi totale è stata valutata con tre livelli di controlli di siero per
T4. Facendo riferimento a un protocollo per la determinazione della precisione secondo le linee
guida CLSI modificato, i campioni sono stati analizzati in 6 replicati per ciclo, due volte al giorno
per 5 giorni, con un totale di N = 60.
Livello
n= 60
Intra-ciclo
Analisi totale
Media (μg/dl)
SD (μg/dl)
CV%
SD (μg/dl)
CV%
1
4,1
0,14
3,4
0,28
6,9
2
11,0
0,41
3,7
0,81
7,4
3
16,2
0,62
3,8
1,05
6,5
Sensibilità
La sensibilità, definita come la più bassa concentrazione distinguibile dal siero negativo con
una confidenza del 95%, è di 0,7 μg/dl.
Accuratezza
108 campioni clinici con un intervallo di concentrazioni di T4 comprese tra 1,3 μg/dl e 87,1 μg/
dl sono stati analizzati con il saggio immunoenzimatico per tiroxina DRI e un saggio per T4
disponibile in commercio. È stata ottenuta una correlazione con equazione di regressione di DRI
(y) = 1,02 (x) - 0,63 e un fattore di correlazione (r) di 0,993.
Specificità
I composti con struttura chimica simile a quella della tiroxina e alcuni composti utilizzati in
concomitanza sono stati analizzati per valutare potenziali cross-reattività nel saggio per la
tiroxina. Il valore % di cross-reattività è stato determinato come percentuale di concentrazione
T4 equivalente osservata quando il cross-reattivo alla concentrazione analizzata veniva
aggiunto al siero negativo per T4.
Composto
Conc. testata (μg/dl)
% cross-reattività
Triiodotironina (T3)
10
3,2*
Acido triiodotiroacetico
10
0,5*
Acido tetraiodotiroacetico
10.000
25,3*
3,5-diiodotironina
10.000
0,0
3,5-diiodotirosina
10.000
0,0
Iodotirosina
10.000
0,0
Metimazolo
10.000
0,0
Fenilbutazone
10.000
0,0
Fenitoina
10.000
0,0
Propiltiouracile
10.000
0,0
Tirosina
10.000
0,0
Acetaminofene
100.000
0,0
Acido acetilsalicilico
100.000
0,0
* Le concentrazioni analizzate superano di gran lunga le normali concentrazioni sieriche di tali composti. Pertanto la
cross-reattività non è clinicamente significativa.
Campioni emolizzati (fino a 800 mg/dl di emoglobina), lipemici (fino a 1000 mg/dl di trigliceridi o
400 mg/dl di colesterolo) e itterici (fino a 30 mg/dl di bilirubina) non hanno mostrato interferenze
clinicamente significative con il saggio.
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Assistenza clienti e
tecnica USA:
1-800-232-3342
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Tel.: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10
Per aggiornamenti del foglietto illustrativo, visitare la pagina:
www.thermoscientific.com/diagnostics
Altri paesi:
Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific locale.
0475-7
2015 09
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