INSEGNAMENTO SETTORE SCIENTIFICO DISCIPLINARE ANNO DI CORSO SEMESTRE CFU TOTALI MODALITA’ DI VERIFICA DEL PROFITTO FISIOLOGIA CELLULARE BIO/09 I II 6 ORALE OBIETTIVI DELL’INSEGNAMENTO: Ci si propone di preparare lo studente a studi avanzati o ricerche di fisiologia, presentando l’ intreccio di aspetti teorici e sperimentali, caratteristico della ricerca fisiologica. TESTI CONSIGLIATI: - D’Angelo e Peres, Fisiologia, Vol. I, EdiErmes. Zygmond et al., “Neuroscienze cellulari e molecolari”, EdiSes Johnston e Wu, “Cellular Neurophysiology”, MIT Press. Hille, ”Ion channels in excitable membranes”, Sinauer. Weiss, ”Cellular Biophysics”, MIT Press. Aidley, ”The physiology of excitable cells”, Cambridge University Press. Jackson, Molecular and Cellular Biophysics, Cambridge University Press. Byrne e Roberts, From Molecules to Networks, Elsevier. PROGRAMMA DELL’INSEGNAMENTO: FONDAMENTI DI BIOFISICA CELLULARE Introduzione storica. Ipotesi di Bernstein. Potenziale di Nernst. Diffusione ed Elettrodiffusione (equazione di Nernst-Planck). Modello di Goldman. Determinanti del potenziale di riposo. Effetto dell’attività elettrica di membrana sulla composizione ionica dell’ambiente intra- ed extracellulare. TRASPORTATORI DI MEMBRANA E CONTROLLO DEL VOLUME CELLULARE Fisiologia dei trasportatori: potenziale di equilibrio, correnti di trasportatore e loro influenza sul potenziale di riposo (esempio della pompa Na/K). Equilibrio di Donnan. Controllo del volume cellulare: interazione di canali e trasportatori (RVD ed RVI). Edema cerebrale ed esperimenti nel SNC: astrociti e neuroni. Acquaporine. Ruolo dei canali ionici nella migrazione dei gliomi. Trasportatori di neurotrasmettitori, scambiatore Na/Ca. CANALI IONICI A) Canali ionici attivati da ligando. Il recettore nicotinico come paradigma. Esperimenti classici sulle correnti postsinaptiche. Cenni al controllo nervoso del raggruppamento degli AChR postsinaptici, agrina e MuSK. Proprietà di singolo-canale e relazione con le proprietà macroscopiche. Attivazione da ligando. Stati delle proteine-canale. Cenni sull’ analisi probabilistica dei canali ionici. Struttura-funzione dei canali ionici: metodi di studio ed espressione in sistemi eterologhi. Alcune analogie tra canali ionici ed enzimi. Rassegna dei canali ionici non attivati dal Vm: recettori per ACh, GABA, GLU; canali attivati da nucleotidi ciclici; canali di sodio epiteliali. B) Canali ionici voltaggio-dipendenti. Cinetica delle correnti macroscopiche. Attivazione ed inattivazione allo stato stazionario e loro determinanti strutturali. Interpretazione secondo la teoria di Boltzmann. Cenni sulla selettività dei canali ionici. Principali tipi di canali ionici voltaggio-dipendenti e ruolo in diversi contesti fisiologici; controllo del K+ extracellulare nel fluido cerebrospinale..Cenni ad alcune patologie prodotte dalla mutazione di canali ionici. MOTILITA’ E MIGRAZIONE Motilità dipendente da flagelli, ruolo del gradiente di pH, chemoattrazione e chemorepulsione. Controllo da Ca 2+. Controllo della motilità degli spermatozoi. Migrazione ameboide, modulazione da Ca2+ e ruoli diversi dei canali del K+: volume, citoscheletro, adesione alla matrice extracellulare. Ruolo dei canali ionici nell’ invasività dei gliomi. CONTROLLO DEL PH CELLULARE Meccanismi di estrusione dei protoni. Pompe protoniche. Antiporto Na/H, struttura, funzione, metodi di studio, dipendenza dagli ioni intra- ed extracellulari, regolazione. Scambiatori Cl/HCO3, cotrasporti elettrogenici Na/HCO3. antiporti elettroneutri Cl/NaHCO3. Metodi di studio in neuroni ed astrociti. Alterazioni del pH nelle cellule del sistema nervoso e meccanismi compensativi. METODI OTTICI E STUDI IN CELLULE INTATTE Microiniezione, uso di sonde fluorescenti e principali fonti di artefatto (“ratio dyes”), microscopia confocale, calmoduline fluorescenti, fotolisi di composti “caged”, sonde per NO e pH, ecc.). Omeostasi del Ca2+ intracellulare, regolazione da Ca2+, IP3, cADPR, NAADP, S1P. Interruzione del segnale. Esempi: onde di calcio alla fecondazione, durante il ciclo cellulare ed in cellule secernenti.