VEQ in Biologia Molecolare ciclo 2013
HBV DNA
HIV RNA
HCV RNA
Genotipo HCV
Firenze 21 ottobre 2014
Maria Grazia Colao
VEQ 2013
1
2
54
7
1
4
2
17
3
5
2
4
1
3
112 partecipanti
4
2
Metodi utilizzati
Gruppi di elaborazione dati
Risultati QUALITATIVI
TMA o PCR
Risultati QUANTITATIVI
bDNA
PCR End Point
PCR Real Time Abbott
PCR Real Time Taqman Roche
Altre amplificazioni Real Time
Gruppi di elaborazione dati
Altre Real Time
Ditta
Strumento per
estrazione
Strumento per
amplificazione
Genedia
Rotor Gene 3000
Artus/Qiagen
Rotor Gene 3000
Qiagen
QiaCube
Rotor Gene 3000
Bio Merieux
Easy Mag
RT PCR Applera
System
Siemens
Versant Sample
preparation
Versant K PCR
HCV RNA
VEQ 2013
Campione 2 : genotipo 1a
108 risultati
Campione 5 : genotipo 2a2c 108 risultati * risultati quantitativi espressi in UI/ ml
Campione 8 : genotipo 1a
108 risultati **
*1 risultato inf. alla soglia di sensibilità della metodica utilizzata e **1 ris.
HCV RNA
VEQ 2013
VEQ 2013
HCV RNA
VEQ 2013
HCV RNA
VEQ 2013
VEQ 2013
HCV RNA
VEQ 2013
HCV RNA
VEQ 2013
VEQ 2013
HBV DNA
Campione 3 :
Campione 6 :
Campione 9 :
100 risultati
102 risultati
93 risultati
VEQ 2013
risultati quantitativi espressi in UI/ ml
HBV DNA
VEQ 2013
HBV DNA
VEQ 2013
HBV DNA
VEQ 2013
HIV RNA
Campione 1 :
Campione 4 :
Campione 7 :
81 risultati
77 risultati *
75 risultati
VEQ 2013
risultati quantitativi espressi in copie/ ml
*4 risultati neg/ inferiori alla soglia di sensibilità della metodica utilizzata
HIV RNA
VEQ 2013
HIV RNA
VEQ 2013
HIV RNA
VEQ 2013
HIV RNA
VEQ 2013
I test di Biologia Molecolare
nelle infezioni delle
epatiti (HBV e HCV) e di HIV
Infezioni virali croniche
Metodi molecolari
Identificare l’agente infettivo
Quantificare la carica virale
Caratterizzare il genotipo
Identificare le variazioni genetiche
Test molecolari NAT
Utilizzati per lo screening dei donatori
Molto sensibili
Risultato qualitativo
Test molecolari NAT
Sensibilità analitica
Procleix Tigris
System (Chiron)
Standard
Test
OMS HIV1 (97/650)
dHIV 1 Ultrio Plus 19.6 (15.6-27.6) UI/ml
11.8 (9.4-16.6) copie/ml
OMS HCV (96798)
dHCV Ultrio Plus
3.3 (2.6-4.6) UI/ml
OMS HBV (97/750)
dHBV Ultrio Plus
2.5 (2.0-3.7) UI/ml
Sensibilità analitica
TaqScreen MPX
(Roche)
Standard
Test
Probabilità di rilevamento (limiti fiduciali 95%)
II Standard OMS
HIV 1 gruppo M
50.3 (43.3-59.9) UI/ml
30.2 (26.0- 35.9) copie/ml
II Standard OMS
HCV
6.8 (5.8-8.3) UI/ml
II Standard OMS
HBV
2.3 (2.0-2.8) UI/ml
Probabilità di rilevamento (limiti fiduciali 95%)
Rischio Residuo
Test molecolari per HIV
Diagnosi precoce
Inquadramento e gestione del paziente
Decisione al trattamento
Monitoraggio terapia
Valutazione della farmacoresistenza
HIV
Solo una diagnosi precoce ci consente di controllare
la trasmissione
Non abbiamo un vaccino
Disponiamo di molti farmaci ma non eradichiamo il
virus
Obiettivo da raggiungere “soppressione
virologica”
Limita i danni provocativirus
Limita l’insorgenza di mutazioni genetiche che rendono il
virus resistente ai farmaci e che proprio la terapia
farmacologica selezionerebbero
Test molecolari per HIV RNA
1° gen
2° gen
3° gen
Test molecolari Real Time
Utilizzati per il monitoraggio
Sensibilità e specificità elevata
Semplicità d’uso e basso rischio di contaminazione
Accuratezza ed ampio range dinamico (101-109)
Risultati: quantitativi e “qualitativi”
Test Molecolari Real Time:
possibili risultati
Valore > LLoQ e all’interno del range dinamico del
test
Risultato quantitativo
Valore < LLoQ
TARGET NOT DETECTED
< LLoQ
(DETECTABLE)
Che peso può avere questa distinzione?
HIV RNA e VIREMIA RESIDUA
Cinetica della viremia plasmatica in ART
From Hilldorfer BB et al. Curr HIV/AIDS Rep 2012
HIV RNA - VIREMIA RESIDUA e
rischio di rebound virologico
2012
2012
HIV RNA - VIREMIA RESIDUA e
rischio di rebound virologico
Test molecolari per HBV e HCV
HBV
HCV
Test qualitativo
Test qualitativo
Test quantitativo
Test quantitativo
Genotipizzazione
Genotipizzazione
Test per la valutazione
Test per la valutazione
della farmacoresistenza
della farmacoresistenza
Test molecolari per HBV DNA
Diagnosi precoce
Inquadramento e gestione del paziente
Identificare portatori inattivi/attivi
Diagnosticare epatite B occulta
Decisione al trattamento
Monitoraggio terapia
Linee guida EASL 2012
HBV DNA:
Monitoraggio della terapia
HBV DNA:
Monitoraggio della terapia
Lo scopo della terapia è raggiungere e mantenere
l’inibizione della replicazione virale
Possibile l’insorgenza di mutanti resistenti
ha importanza la valutazione della viremia
residua?
Trattamento HBV e attività antivirale
Potenza: rapidità con cui un farmaco induce la soppressione della replica virale
Barriera genetica: n di mutazioni necessarie al virus per replicare in presenza di
quel farmaco bassa barriere genetica: alta probabilità di sviluppare resistenza
HBV DNA e VIREMIA RESIDUA
Test molecolari per HCV RNA
Diagnosi precoce
Inquadramento e gestione del paziente
Decisioni per il trattamento (valutare anche genotipo)
Monitoraggio terapia
Rapida
Completa
Sostenuta
HCV terapia: obiettivo
Linee guida Europee 2014
RVG: Response Guided Therapy
HCV RNA:
Monitoraggio della terapia
Lo scopo della terapia per HCV è raggiungere e
mantenere una SVR
ha importanza la valutazione della viremia
residua?
HCV RNA e VIREMIA RESIDUA
HCV terapia standard e nuove terapie
Terapia Standard Peg IFN + RBV
Durata e dosi differenti a seconda del genotipo virale
Risposte variabili a seconda del genotipo
insoddisfacente per g1 (30-50%)
Triplice terapia Peg IFN + RBV + 1DAA
Migliora la risposta a g1 (60-70%)
Profilo di tollerabilità complesso ed effetti collaterali
Rapido emergere di resistenza farmacologica
Monitoraggio a tempi definiti e tempi rapidi di
risposta
Necessità di aderenza alle stopping rules
HCV RNA: confronto tra metodi
Cobas TaqMan
(Roche Molecular System)
≥ 15 IU/mL
Not Detected
< 15 IU/mL
(Detected)
Not Detected
9
12
1
< 15 IU/mL
(Detected)
3
12
2
≥ 15 IU/mL
2
19
82
Versant kPCR
(Siemens Healthcare
Diagnostic)
Turriziani - Università La Sapienza Roma
Grazie per l’attenzione
