Replicazione e trascrizione RNA Inizia sintesi ex-novo RNA prodotto si stacca dalla doppia elica di DNA per liberare nuovi siti (più cicli) un gran numero di trascritti in breve tempo per ciascuna unita trascrizionale dopo la trascrizione i filamenti di DNA dietro si riassociano è meno precisa 1 errore ogni 10000 nucleotidi È estremamente regolato Replicazione e trascrizione Flusso d’informazione processo mediante il quale l’informazione della sequenza nucleotidica viene trasferita dal DNA all’RNA Fondamentali differenze tra procarioti ed eucarioti Maturazione Del RNA Reazione catalizzata dalla RNA polimerasi La chimica della sintesi degli RNA è la stessa per tutti i tipi di RNA. Dopo aver selezionato il corretto nucleotide trifosfato, l’enzima catalizza la formazione del legame fosfodiesterico utilizzando ioni Mg2+ quali cofattori (Figura 5). La reazione di allungamento dell’RNA in fase di sintesi è: (RNA)n + rNTP → (RNA)n+1 + PPi Nei batteri, l’enzima intero (oloenzima) è costituito dalle subunità α2ββ’σ. La subunità σ è fondamentale perché aiuta la RNA polimerasi nella ricerca del sito di inizio della trascrizione. La sua dissociazione origina il nucleo dell’enzima, ovvero la RNA polimerasi α2ββ’ cataliticamente attiva. TRASCRIZIONE • La trascrizione implica la sintesi di una catena di RNA, identica in sequenza ad uno dei filamenti di DNA. • • Viene sintetizzato in direzione 5’-3’ ed è complementare allo stampo contrariamente alla sintesi del DNA, la sintesi dell’RNA può iniziare de novo. La prima base aggiunta al 5′ è pppG oppure pppA . INIZIO Trascrizione • (filamento codificante) o stampo • Filamento (non stampo ) simile all’RNA Trascrizione Trascrizione Trascrizione Enzima: RNA polimerasi Il promotore Il sito di inizio Sequenza di terminazione Trascrizione Unità di trascrizione (sequenza di DNA) 1) Inizia a livello del promotore (punto d’inizio +1) 2) Termina a livello del terminatore 3) Può codificare anche più di un gene Trascrizione Trascrizione 25 bp Trascrizione Riconoscimento stampo : la polimerasi si lega al promotore e i filamenti stampo di aprono. L’inizio : sintesi dei primi legami nucleotidici nell’RNA, possibili eventi abortivi. L’allungamento : l’enzima si sposta sul DNA e determina la crescita della catena di RNA , l’enzima spostandosi svolge il duplex. La terminazione : riconoscimento del punto che non codifica per alcuna base, terminano i legami fosfodiesterici e il complesso trascrizionale libera lo stampo. RNA polimerasi RNA polimerasi Subuni t β' β α Size Gene Function 160 kDa 155 kDa 40 kDa rpoC rpoB rpoA s 70 kDa (general) rpoD form the catalytic center. form the catalytic center. enzyme assembly; also binds UP sequence in the promoter confers specificity for promoter; binds to -10 and -35 sites in the promoter RNA polimerasi RNA polimerasi