Riconoscimento delle Biobanche per Diagnosi e Ricerca in Regione Liguria. Biobanca Integrata Tessuto (BIT) Istituto Giannina Gaslini per la cura, difesa, ed assistenza dell’infanzia e della fanciullezza Rev. 26/03/2009 Pagina 1 di 3 Attività e attrezzature dedicate SETTORE TESSUTO ACCETTAZIONE E PRIMO TRATTAMENTO DEL MATERIALE TISSUTALE IN CONDIZIONI DI STERILITA’ E SICUREZZA PER L’OPERATORE IL PATOLOGO EFFETTUA VALUTAZIONE , PREPARAZIONE E CAMPIONAMENTO DEL MATERIALE, CHE PERVIENE DIRETTAMENTE DALL’ISTITUTO O DA STRUTTURE ESTERNE PRESSO L’U.O. ANATOMIA PATOLOGICA IL PATOLOGO EFFETTUA VALUTAZIONE , PREPARAZIONE E CAMPIONAMENTO DEL MATERIALE PRESSO LA SALA OPERATORIA PROCESSAZIONE AUTOMATICA DEL CAMPIONE DA AVVIARE ALL’ESAME ISTOPATOLOGICO CONGELAMENTO DI PARTE DEL CAMPIONE, SPECULARE AL CAMPIONE DESTINATO ALLA PROCESSAZIONE PER LA DIAGNOSI VALUTAZIONE BIOMOLECOLARE DEL CONTENUTO DI DNA ( DNA INDEX) INCLUSIONE IN PARAFFINA PER DARE CONSISTENZA AL CAMPIONE CHE DOVRA’ ESSERE TAGLIATO AD UNO SPESSORE DI 3MICRON TAGLIO AL MICROTOMO ROTATIVO ED ALLESTIMENTO DEL PREPARATO DA OSSERVARE AL MICROSCOPIO DOPO OPPORTUNE COLORAZIONE CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE IN VAPORI DI AZOTO IN CRIOCONGELATORE SERVOASSISTITO, PER UN PERIODO DI TEMPO INDEFINITO ARCHIVIAZIONE INFORMATICA DEI DATI IN DATABASE BIT (settore tessuto). I CAMPIONI SONO IDENTIFICABILI MEDIANTE UN CODICE UNIVOCO. IL SOGGETTO DA CUI ESSO PROVIENE E’ SEMPRE RICONOSCIBILE DA PARTE DI OPERATORI AUTORIZZATI . IMMUNOCOLORAZIONE AUTOMATICA DEL PREPARATO PER FENOTIPIZZARE LA LESIONE TISSUTALE E FISH PARTE DEL CAMPIONE, SPECULARE AL CAMPIONE DESTINATO ALLA PROCESSAZIONE PER LA DIAGNOSI CONSEGNATO ALL LABORATORIO DI BIOLOGIA MOLECOLAREPER ANALISI MOLECOLARE SETTORE GENOMICA BIT-IRCCS Istituto Giannina Gaslini – Largo Gerolamo Gaslini 5, 16147 Genova Quarto – Italia Telefono:++39 010 5636 210 / ++39 010 5636 633 e-mail: [email protected]; [email protected] Riconoscimento delle Biobanche per Diagnosi e Ricerca in Regione Liguria. Biobanca Integrata Tessuto (BIT) Istituto Giannina Gaslini per la cura, difesa, ed assistenza dell’infanzia e della fanciullezza Rev. 26/03/2009 Pagina 2 di 3 Attività e attrezzature dedicate SETTORE GENOMICA IL CAMPIONE PERVIENE AL LABORATORIO DI BIOLOGIA MOLECOLARE IN CONTENITORI CON CONSERVANTE ADEGUATO (ALLPROTECT TISSUE REAGENT) E VIENE REGISTRATO IN SOFTWARE DEDICATO. VIENE VALUTATO IL VOLUME DEL CAMPIONE E VIENE TRATTATO PER L’ESTRAZIONE DI DNA E RNA E PROTEINE. TUTTI I DERIVATI GENOMICI VENGONO VALUTATI QUANTITATIVAMENTE CON ANALISI SPETTROFOTOMETRICA AD ALTA RISOLUZIONE (NANODROP THERMOSCIENTIFIC) . IL DNA È VALUTATO QUALITATIVAMENTE CON ANALISI DI ELETTROFORESI, MENTRE L’RNA, IL miRNA E LE PROTEINE SONO STUDIATI NELLA LORO QUALITÀ ATTRAVERSO UN ANALISI DI ELETTROFORESI CAPILLARE EFFETTUATA MEDIANTE LA STRUMENTAZIONE AGILENT 2100 BIOANALYZER SITUATA NELLA CORE FACILITY DELL’ISTITUTO GASLINI. IL MATERIALE DERIVATO VIENE ETICHETTATO, TRATTANDO I DATI ANAGRAFICI DEL PAZIENTE SEGUENDO LA NORMATIVA VIGENTE (CODICE DELLA PRIVACY.) LA CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE AVVIENE IN CONGELATORE SERVOASSISTITO. BIT-IRCCS Istituto Giannina Gaslini – Largo Gerolamo Gaslini 5, 16147 Genova Quarto – Italia Telefono:++39 010 5636 210 / ++39 010 5636 633 e-mail: [email protected]; [email protected] Riconoscimento delle Biobanche per Diagnosi e Ricerca in Regione Liguria. Biobanca Integrata Tessuto (BIT) Istituto Giannina Gaslini per la cura, difesa, ed assistenza dell’infanzia e della fanciullezza Rev. 26/03/2009 Pagina 3 di 3 Attività e attrezzature dedicate I DATI QUALITATIVI E QUANTITATIVI DEL MATERIALE ESTRATTO VENGONO INSERITI NEL DATABASE CHE VIENE COSTANTEMENTE AGGIORNATO UNA ALIQUOTA DI RNA VIENE UTILIZZATO PER LA TIPIZZAZIONE MOLECOLARE UNA ALIQUODA DI DNA VIENE INVIATO PER IL CGH ARRAY IN ALCUNE CIRCOSTANZE VENGONO STAMPATE CHIPS DEDICATE UTILIZZANDO IL SISTEMA DI DISPENSAZIONE AUTOMATICA FREEDOM EVO 75 TECAN PER LA PREPARAZIOJE DI OLIGONUCLEOTIDI L’INTEGRITA’ DEL DNA VIENE VALUTATA TRAMITE CGH ARRAY I CUI RISULTATI VENGONO MISURATI TRAMITE LO SCANNER AGILENT (AGILENT TECHNOLOGIES) L’ELABORAZIONE BIOINFORMATICA DEI DATI VIENE EFFETTUATA GRAZIE ALL’IMPIEGO DI SOFTWARE DEDICATI CHE PERMETTONO L’ANALISI INTEGRATA DEI DATI DI TIPIZZAZIONE MOLECOLARE (CGH, miRNA ED ESPRESSIONE GENICA) E I DATI CLINICI. I DERIVATI GENOMICI SUBISCONO UN PROCEDIMENTO PREPARATIVO ALLA TIPIZZAZIONE GENOMICA TRAMITE MICROARRAY. QUESTI VENGONO PREPARATI ATTRAVERSO L’UTILIZZO DELLO SPOTARRAY 24 MICROARRAY PRINTING SYSTEM (PERKINELMER). LA RIPRODUCIBILITA’ E L’OTTIMIZZAZIONE DELL’IBRIDIZZAZIONE DELLE CHIPS ALLE SONDE MARCATE VIENE GARANTITO DALL’UTILIZZO DELLO STRUMENTO HS400 IBRIDIZZATORE TECAN I DATI DELL’ANALISI DI MICROARRAY VENGONO ACQUISITI TRAMITE SCANSIONE LASER GRAZIE AL GENEPIX 4000B MICROARRAY SCANNER (AXON). BIT-IRCCS Istituto Giannina Gaslini – Largo Gerolamo Gaslini 5, 16147 Genova Quarto – Italia Telefono:++39 010 5636 210 / ++39 010 5636 633 e-mail: [email protected]; [email protected]