Biologo della Fecondazione Assistita
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X° CICLO DI CONFERENZE Professione Biologo “Biologo della Fecondazione Assistita” Giovedì 27 settembre 2012 Alessandro Miceli Promea S.p.A. - Torino [email protected] Dipartimento di Biologia Animale e dell’Uomo Via Accademia Albertina, 13 - TorinoAssistita Fisiopatologia della araiproduzione Umana e Tecniche di Riproduzione CARIOTIPO UMANO I cromosomi sessuali X e Y (la loro denominazione è riferibile all'aspetto che assumono alla meiosi che li rende simili rispettivamente a una x e a una y) sono differenti per dimensioni e forma, e ciò riflette il differente contenuto genetico. Il cromosoma Y è un cromosoma sui generis, è molto più piccolo, infatti è grande circa 1/3 del cromosoma X, contiene pochissimi geni (solo quelli necessari per la determinazione del sesso maschile) geni quindi meno numerosi e differenti da quelli portati dal cromosoma X ed ha un elevato numero di sequenze ripetitive. DETERMINAZIONE DEL SESSO LA FUNZIONE RIPRODUTTIVA ASSE IPOTALAMO - IPOFISI - GONADI IPOTALAMO ghiandola che, integrando segnali endocrini e segnali neurologici, secerne neuropeptidi che stimolano l’ipofisi a produrre tropine. In particolare produce GNRH Gonadotropin Releasing Factor. IPOFISI ghiandola il cui afflusso ematico deriva completamente dall’ipotalamo, attraverso il sistema portale ipotalamo-ipofisario, suddivisa in Adenoipofisi anteriore che produce tropine fra cui le gonadotropine (FSH - Follicle Stimulating Hormone ed LH Luteinizing Hormone) e Neuroipofisi posteriore che secerne Ossitocina e Vasopressina. GONADI organi bersaglio delle gonadotropine con funzione steroidogenica (androgeni ed estrogeni) e gametogenica. APPARATO RIPRODUTTIVO MASCHILE Testicoli, Prostata, Vescichette Seminali, Ghiandole Bulbo-Uretrali, Pene APPARATO RIPRODUTTIVO FEMMINILE Ovaie, Tube di Falloppio, Utero, Vagina CICLO MESTRUALE Il ciclo mestruale è il periodo compreso tra una mestruazione e la successiva. Accompagna la donna dalla prima mestruazione (menarca) fino all'ultima mestruazione (menopausa). Il ciclo mestruale è regolato da diversi ormoni che attraverso il circolo ematico raggiungono vari organi dove svolgono la loro azione specifica. Il centro regolatore è rappresentato dall'ipofisi, che produce due ormoni (gonadotropine): follicolostimolante FSH e luteinizzante LH. Questi ormoni ipofisari agiscono sull'ovaio promuovendo la maturazione della cellula uovo con la sua liberazione durante l'ovulazione e la produzione di due ormoni, estrogeni e progesterone. Gli ormoni ovarici agiscono soprattutto sull'utero stimolando la proliferazione dell’endometrio (estrogeni) e preparandolo ad una gravidanza (progesterone). NELL’UOMO, COME IN TUTTI GLI ANIMALI, I GAMETI VENGONO PRODOTTI DA ORGANI SPECIALIZZATI, LE GONADI GONADE GONADE MASCHILE FEMMINILE TESTICOLO OVAIO Struttura dello spermatozoo umano 400 x campione colorato 200 x campione a fresco Struttura dell’ovocita umano Ovaio Follicolo di Graaf Ovocita Ovocita denudato (decoronizzato) Ovocita con cumulo ooforo e corona radiata La Fecondazione Naturale Fecondazione Reazione Acrosomiale La reazione acrosomiale comporta una fusione tra la membrana plasmatica dello spermatozoo e quella acrosomiale nella regione anteriore con una specie di vescicolazione che permette la secrezione di enzimi litici acrosomali che digeriscono il cumulo ooforo e la zona pellucida. Dalla fusione di due gameti si costituirà quindi un'unica cellula con un patrimonio genetico completo che suddividendosi in maniera corretta darà origine ad un nuovo individuo. Ma . . . . quando il figlio non arriva ? ??? Centro di Medicina della Riproduzione VALUTAZIONE E PREPARAZIONE DEL LIQUIDO SEMINALE MONITORAGGIO ECOGRAFICO DELL’OVULAZIONE Immagine ecografica di un’ovaia durante farmacologica dell’ovulazione. la induzione Sono visibili vari follicoli che appaiono come aree nere. I punti colorati evidenziano un follicolo maturo di 17 mm di diametro. IUI - INTRAUTERINE INSEMINATION Quando due o tre follicoli hanno raggiunto la misura idonea, viene indotta l’ovulazione con una ulteriore iniezione di ormone (gonadotropina corionica umana o hCG). In periodo periovulatorio, un campione di seme fresco viene preparato e posto nel fondo dell’utero della partner mediante un sottile tubicino (catetere). Nella IUI, come nelle altre tecniche di riproduzione assistita, dopo l’entrata in vigore della legge 40/2004, si utilizza esclusivamente il campione seminale del partner (inseminazione omologa). FIVET - FERTILIZATION IN VITRO END EMBRYO TRANSFER ICSI - INTRACITOPLASMATIC SPERM INJECTION Sonda ecografica endovaginale Termoblock Pompa di aspirazione a vuoto Provette PICK-UP OVOCITARIO Durante fluido il pick-up follicolare aspirato provette. il viene all’interno di Il fluido follicolare, riversato in piastre di coltura, viene esaminato allo stereomicroscopio per la ricerca degli ovociti. ICSI FIVET FIVET ICSI Ovocita maturo con cumulo ooforo chiaro ed espanso Ovocita immaturo, con cumulo ooforo scuro e compattato Ovocita immaturo, con cumulo ooforo scuro e compattato Ovocita molto immaturo - “Vescicola Germinale” (Profase I) Ovocita immaturo ”Metafase I” Ovocita maturo ”Metafase II” Vescicola germinale Metafase I Metafase II Ovocita di bassa qualità, con vacuoli e globulo polare irregolare Ovocita con zona pellucida fratturata (Fractured Zone) ed ooplasma in estrusione Zigote diploide, 2 pronuclei (46 cromosomi) Zigote triploide, 3 pronuclei anziché 2 (69 cromosomi anziché 46) Zigote poliploide DAY 2 DAY 2 DAY 3 DAY 5 Hatching Embrionario Assisted Hatching Soluzione Acida di Tyrode Laser Crioconservazione Spermatozoi Ovociti Embrioni Transfer embrionario Catetere con embrioni Immagine ecografica di un transfer Linea rossa: limiti del collo dell’utero Linea blu: limiti dell’intero utero Linea verde: limiti della cavità uterina Linea gialla tratteggiata: catetere che contiene gli embrioni Grazie per l’attenzione!
