Colture cellulari

Colture cellulari
UTILIZZO DELLE COLTURE
CELLULARI
• Elettrofisiologia
• Studio dei recettori
• Modelli di morte cellulare
• Farmaci
CELLULE CONNETTIVALI
Fibroblasti
Osteociti
Condrociti
Adipociti
CELLULE MUSCOLARI
Miocardiociti
Cellule muscolari scheletriche
Cellule muscolari lisce
CELLULE NERVOSE
Glia
Neuroni
CELLULE EPITELIALI
Epatiche
Alveolari
Bronchiali
Cutanee
Vescicali
Renali
CELLULE VARIE
Endocrine
Tumorali
Endoteliali
FATTORI SPERIMENTALI CHE
FAVORISCONO:
La proliferazione:
bassa densità cellulare
bassa concentrazione di Ca++
fattori di crescita
La differenziazione:
alta densità cellulare
alta concentrazione di Ca++
ormoni
NGF
COLTURE PRIMARIE (appena isolate)
linee cellulari o sottocolture
COLTURA CONTINUA O IMMORTALE
(più facili da coltivare, instabili geneticamente,
possono essere diverse dalle cellule di origine)
COLTURE NEOPLASTICHE
(elevata capacità di riproduzione, molto simili
alle cellule da cui originano)
Componenti del siero
Albumina
Funzioni note o presunte
Trasporto molecole biologiche
Fibronectina
Adesione cellulare
Alfa-2-macroglobulina
Inibizione tripsina
Transferrina
Trasporto ferro
Ormoni
Controllo di funzioni metaboliche
Fattori di crescita
Insulin-like growth factors (IGF), platlet derived growth factor
(PDGF), Somatomedina, Epidermal growth factor (EGF),
Endothelial growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF),ecc.
Lipidi e acidi grassi, Minerali, Metaboliti, Polipeptidi
ADESIONE CELLULARE
• Polilisina
• Collagene
• Fibronectina
PREPARAZIONE DI COLTURE
• PRELIEVO TESSUTO (COLTURE PRIMARIE)
• INCUBAZIONE
• RIMOZIONE E LAVAGGIO
• DISTRIBUZIONE SU PIASTRA (1.00010.000)
• CRESCITA
PLASTICHE PER COLTURE CELLULARI
Per effettuare il conteggio:
dopo aver pulito la camera, montata
correttamente, depositato un
dato volume di cellule, al
microscopio si contano le cellule
presenti nei quadrati delimitati da
una doppia barra
Resistenza elettrica
Le cellule sono dei cattivi conduttori di elettricità e oppongono
resistenza al passaggio della corrente elettrica.
Il contatore Coulter è una apparecchiatura in cui una
sospensione cellulare viene fatta passare attraverso una
sottilissima fessura su entrambi i lati della quale sono posti
degli elettrodi. Una cellula che si frapponga tra i due
elettrodi impedisce il passaggio della corrente e determina
una caduta di voltaggio che viene registrata sotto forma di
un impulso la cui altezza è proporzionale al volume della
cellula.
Contando gli impulsi e la loro forma, tale sistema consente di
determinare il numero e le dimensioni delle cellule presenti in
una data sospensione. Non si distinguono le cellule vive da
quella morte e i valori sono quindi riferiti a conte totali.
Elutriator
CONTAMINAZIONE
• BATTERICA
• VIRALE
• MICOPLASMA
Controllo della vitalità cellulare
• Coloranti
• Respirazione cellulare
• Incorporazione timidina marcata
• Incorporazione leucina marcata
Dove trovare le linee cellulari
•Produzione in laboratorio
•Banche cellule–European Collection of Cell Culture
www.ecacc.org.uk
–AmericanTissueCultureCentre (USA)
www.atcc.org
–National Cell Culture Center (USA)
www.nccc.com
–German Collection of Microorganism and Cell Culture
www.dsmz.de
–IZS Centro Substrati Cellulari
www.bs.izs.it
–IST Servizio Biotecnologie
www.biotech.ist.unige.it
Conservazione di linee cellulari