Tecniche di estrazione del DNA genomico e plasmidico e applicazioni

Tecniche di estrazione del DNA genomico
e applicazioni
Successivamente si aggiunge
resina e cloroformio, per poi
centrifugare; si ottiene così
nella parte superiore il DNA,
che
verrà
precipitato
mediante
isopropanolo
freddo.
Il DNA ottenuto viene,
quindi,
solubilizzato
in
acqua e visualizzato tramite
elettroforesi.
La foglia congelata e
sminuzzata viene posta
nel mortaio per ridurla
in polvere ed in seguito
posta in un tubo da
centrifuga
con
le
soluzione I, II e RNAsi,
al fine di provocare la
lisi
cellulare
ed
eliminare l’RNA.
Elettroforesi del DNA
L’elettroforesi su gel di agarosio è il metodo standard
utilizzato per separare tramite un campo elettrico
frammenti di DNA di differente lunghezza. Il DNA
viene reso visibile mediante una molecola fluorescente
che si intercala nella doppia elica
Enzimi di restrizione
Gli enzimi di restrizione tagliano, in
corrispondenza di siti di restrizione
(sequenze di DNA che vanno da quattro a
otto nucleotidi), composti da sequenze
palindromiche, ossia dotate di simmetria
bilaterale
nella
composizione
nucleotidica.
Gli enzimi di restrizione sono in
grado di ‘tagliare’ la doppia elica
del DNA, agiscono quindi come
forbici.
Analisi Forense
La genetica forense è la disciplina che si avvale delle scoperte genetiche per indagare sui fatti connessi con l’attività
giudiziaria, politica e penale. Utilizza l’analisi delle differenze nelle lunghezze dei frammenti di restrizione, causate da
perdita o guadagno di siti di restrizione nel DNA.
S.C
S2
S1
S3
S4
1.
2.
3.
SC: scena del crimine
Sn: sospettati
Estrazione del DNA
Digestione con enzimi di restrizione
Analisi elettroforetica
Colpevole
Realizzato da: Giulia Foti, Flavia Pensabene (Liceo Classico Thomas More)