DOTTORATO DI RICERCA - XVII CICLO Dott.ssa Anna Gardini - Tutor: Dott. Cristiano Bombardi CITOARCHITETTURA E CORREDO NEUROCHIMICO DELL’IPPOCAMPO DI CANE Calbindina D-28k Scopo della ricerca: Studiare la citoarchitettura dell’ippocampo di cane , la distribuzione della popolazione neuronale e l’espressione di alcune proteine leganti il calcio (calbindina D-28k, parvalbumina e calretinina) a livello di giro dentato (GD) e nelle aree dell’ippocampo propriamente detto (CA3, CA2 e CA1). Osservare eventuali modificazioni correlate all’età nell’espressione delle suddette proteine. CA3 GD Materiali e metodi: - campioni di ippocampo di sei cani (deceduti/soppressi per problemi non neurologici) - tre giovani (< 3 anni) e tre anziani (>12 anni) - tecniche istologiche (colorazione con tionina) - reazioni di immunoperossidasi mediante anticorpi primari monoclonali diretti verso: parvalbumina (PV), calbindina-D28k (CB-D28k) e calretinina (CR). 2.5X 5X CA2 CA1 Risultati: 5X CALBINDINA D-28k Giro dentato: -Plexiform layer: neuroni CB-ir multipolari con dendriti che si estendono allo str. dei granuli e raramente allo str. molecolare. -Granule cell layer: immunoraettività alla CB nelle cellule dei granuli e a livello di mossy fiber (assoni delle cellule dei granuli che proiettano all’area CA3 dell’ippocampo p.d.). Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1): -Stratum oriens: neuroni CB-ir multipolari o bipolari. -Stratum pyramidale: Differenza nelle aree CA3-CA1 riguardo ai neuroni piramidali: Area CA3: neuroni piramidali CB-ir assenti; Area CA2: neuroni piramidali CB-ir, soprattutto verso lo str. oriens; Area CA1: neuroni piramidali CB-ir disposti su due file. Alcuni cellule non-piramidali (principalmente neuroni multipolari) presenti in tutte le aree dell’ippocampo p.d. (CA3-CA1) con dendriti diretti in tutte le direzioni. -Stratum radiatum: pochi neuroni fusiformi. -Stratum lacunosum-moleculare: rari neuroni fusiformi. PARVALBUMINA Giro dentato: -Plexiform layer: neuroni PV-ir multipolari e alcune cellule ovoidali. -Granule cell layer: occasionali cellule ovoidali o fusiformi. Immunreattività assente nelle cellule dei granuli. -Molecular layer: neuroni fusiformi in prossimità dello str. dei granuli e cellule bipolari al confine con lo str. lac-molecolare. 10X Parvalbumina GD GD 2.5X 10X Hu A β2 A CA1 CA1 SMP B SMP 2.5X β2 B TH 10X Calretinina Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1): -Stratum oriens: neuroni PV-ir fusiformi con lunghi dendriti paralleli alla superficie piale. -Stratum pyramidale: neuroni PV-ir multipolari o bitufted con dendriti che si estendono gli altri strati dell’ippocampo p.d.; IR assente nei neuroni piramidali. Nessuna differenza tra le aree CA3-CA1. -Stratum radiatum: alcuni neuroni fusiformi, piramidali e piramidali invertiti con dendriti diretti sia verso lo str. pyramidale sia verso lo str. lac-moleculare. -Stratum lacunosum-moleculare: piccoli neuroni fusiformi con il loro asse maggiore parallelo alle cellule dello str. pyramidale. GD GD SMP SMP 5X 2.5X CALRETININA Giro dentato: -Granule cell layer: assenza di cellule CR-ir. -Molecular layer: pochi neuroni CR-ir multipolari e ovoidali; neuropilo CR-ir. CA1 Ippocampo p.d. (area CA3, CA2 e CA1): Pochi neuroni CR-ir bipolari, bitufted o multipolari osservati in tutti gli strati dell’ippocampo p.d. 10X Discussione Immunoreattività verso la PV assente nelle cellule dei granuli (GD) e nei neuroni piramidali dell’ippocampo p.d. Presenza di interneuroni PV-ir sia a livello di GD che di ippocampo p.d. Immunoreattività verso la CB-D28k osservata nelle cellule dei granuli e nei neuroni piramidali delle aree CA 1 e CA2, assente nell’area CA3. Presenza di interneuroni CB-D28k a livello di tutti gli strati del GD e dell’ dell’ippocampo p.d. Immunoreattività verso la CR presente a livello di GD (neuropilo marcatamente CR-ir nello str. molecolare) e di ippocampo p.d., con rilevante network neuronale nello str. lacunosum moleculare.